Mesothelial Cell Isolation: A Technique to Isolate Primary Mesothelial Cells From Human Omentum Tissue Specimen

0 views • 4:36 min • April 30th, 2023

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인간 일차 중피 세포(HPMC)는 대망이나 복강에 존재하는 지방 조직층과 같은 많은 내장 기관을 둘러싸

고 있습니다.

중피 세포를 분리하려면 먼저 인간 대망 표본을 적절한 완충액에 담가 과도한 적혈구 또는 적혈구를 제거합니다. 다음으로 대망을 유리 접시에 넣고 조각으로 다집니다. 이것은 조직을 해리시켜 오염된 적혈구와 함께 HPMC를 방출합니다.

조각을 원추형 튜브로 옮기고 원하는 시간 동안 가만히 두십시오. 저밀도 지방이 풍부한 다진 조직은 위쪽으로 올라가고, 조밀한 세포 성분은 아래쪽에 가라앉습니다. 다음으로, HPMC 및 RBC가 포함된 바닥의 액체를 새 튜브로 흡인합니다.

원심분리하여 세포를 수집합니다. 완충액 함유 상청액을 제거합니다. 펠릿을 중피 성장 배지에 재현탁하고 원하는 기간 동안 배양합니다. 배지는 적혈구에 대한 HPMC의 선택적 성장을 촉진합니다.

광학 현미경을 사용하여 세포를 관찰하여 입방체 모양의 인간 중피 세포의 성장을 확인합니다.

수술용 인간 대망 표본을 채취하면 즉시 샘플을 실온 PBS에 담급니다. 침지 후 2시간 이내에 대망을 20밀리리터의 신선한 PBS가 들어 있는 50밀리리터 원추형 튜브로 옮깁니다. 일차 인간 중피 세포 또는 HPMC 및 적혈구를 포함하는 나머지 PBS 세척액을 새로운 50밀리리터 원뿔형 튜브로 옮기고 세포를 회전시킵니다.

그런 다음 튜브 내용물을 10cm 멸균 배양 접시에 붓고 두 개의 메스를 사용하여 조직을 5입방밀리미터 조각으로 다집니다. 일차 인간 중피 세포 또는 HPMC를 분리하려면 대망 조각을 50밀리리터 원뿔형 튜브로 옮기고 고체 조각이 상단으로 떠오를 때까지 1분 동안 기다립니다. HPMC는 적혈구와 함께 튜브 바닥에 침전됩니다.

피펫을 사용하여 중피 세포와 적혈구가 포함된 PBS 세척액을 펠릿 세포가 들어 있는 튜브로 옮기고 세포를 스핀다운합니다. 그런 다음 대망에 20밀리리터의 신선한 PBS를 추가하고 PBS 함유 HPMC 및 RBC를 원래 펠릿 세포에 방금 시연한 대로 세 번 더 수집합니다.

최종 스핀 후, 15밀리리터의 완전 성장 배지에 75제곱센티미터 플라스크에 세포를 도금합니다. 대망 샘플에서 추가 HPMC를 분리하려면 남은 고형 조직을 200RPM 및 섭씨 37도에서 PBS 20밀리리터에 흔듭니다. 10분 후 샘플을 1분 동안 그대로 두어 고형 조직이 튜브 상단으로 올라갈 수 있도록 합니다.

그런 다음 방금 시연한 대로 튜브 바닥에서 HPMC와 RBC를 수집합니다. 이제 2차 세척에서 세포를 회전시키고 15밀리리터의 완전 성장 배지에 별도의 75제곱센티미터 플라스크에 도금합니다. 남아 있는 HPMC를 분리하려면 PBS와 트립신-EDTA 10밀리리터의 혼합물에서 이번에는 조직을 10분 더 흔들고 이러한 HPMC와 RBC를 75제곱센티미터 플라스크에 플레이트합니다.

그런 다음 가습된 환경에서 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 배양합니다. 사용한 배지를 제거하지 않고 3일과 5일에 15밀리리터의 신선한 완전 성장 배지로 도금된 세포에 공급합니다. HPMC는 입육면체 모양과 사이토케라틴-8 및 비멘틴의 발현으로 식별할 수 있습니다.

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Last updated: 18 July 2026