난소 지방 패드 이식 분석: 마우스 모델에서 난소 지방 패드에 세포를 도입하는 생체 내 기술

이식을 통해 세포나 조직 조각을 수혜 동물의 특정 신체 부위에 이식할 수 있습니다. 이는 종양 형성 및 전이에서 미세 환경의 역할을 연구하는 데 도움이 됩니다.

시작하려면 마취된 면역 저하 암컷 마우스를 엎드린 자세로 준비합니다. 생식관을 노출시키기 위해 배측 위치에 외과적 절개를 합니다. 난소와 난관 근처에 위치한 난소 지방 패드를 찾으십시오. 끝이 뾰족한 바늘을 사용하여 난소를 손상시키지 않고 지방 패드의 중간을 뚫는 절개를 합니다.

다음으로, 적절한 기저막 매트릭스와 혼합된 실험 세포의 냉각 현탁액을 지방 패드 절개 부위에 주입합니다. 매트릭스가 응고되고 내부의 세포를 고정하도록 합니다. 난소 지방 패드를 복막에 다시 넣고 절개 부위를 봉합합니다. 마우스가 복구되도록 합니다.

성공적인 이식 시 지방 패드는 적절한 미세 환경을 제공하여 주입된 세포의 확장을 촉진합니다. 매주 마우스를 확인하여 난소 지방 패드에 이식된 세포의 성장을 관찰하십시오.

텍스트 프로토콜에 따라 동계 마우스를 마취한 후 40번 이발기를 사용하여 수술 부위 크기의 두 배 크기를 면도합니다. 포비돈-요오드에 이어 70% 에탄올을 사용하여 세 번의 수술용 스크럽을 수행합니다. 다음으로, 해부 현미경으로 동물을 옮깁니다.

그런 다음 메스를 사용하여 난소 지방 패드 바로 위의 배측 위치를 절개하고 생식관을 노출시킵니다. 그런 다음 멸균 드레이프로 해당 부위를 덮습니다. 다음으로, 뭉툭하고 가는 집게를 사용하여 절개 부위를 통해 난소 지방 패드를 정중선 쪽으로 조심스럽게 당겨 신경과 주요 혈관의 손상을 최소화합니다.

이식으로 인한 성장 지연을 예방하기 위해서는 지방 패드를 끝까지 찢거나 구멍을 뚫으면 출혈이 발생하므로 지방 패드 절개는 가능한 한 정확하게 이루어져야 합니다. 필요에 따라 출혈을 멈추기 위해 응고제를 사용해야 합니다.

28게이지 경사진 바늘을 사용하여 난소 위 3-4mm의 난소 지방 패드에 2-4mm 깊이의 절개를 하여 바늘이 지방 패드의 약 절반만 들어가도록 합니다. 세포 이식의 경우 30게이지 바늘로 주사기에 10-20마이크로리터의 세포 기저막 매트릭스 혼합물을 채우고 지방 패드 절개 부위에 주입합니다.

자궁관 이식의 경우 미세한 집게를 사용하여 자궁관을 집어 얼음 위에 보관된 10-20마이크로리터의 기저막 매트릭스에 넣습니다. 그런 다음 0.1 내지 10 내지 20 마이크로리터 XL 눈금 필터 팁을 사용하여 조직 및 기저막 매