Egg Windowing: 수정란 달걀 껍질을 열어 융모막막 혈관 구조를 노출시키는 방법

된 닭고기 달걀에서 융모막 또는 CAM은 내부 달걀 껍질 막 아래에 위치한 고도로 혈관화된 층입니다. 배아 발달을 지원하는 기능을 합니다.

완전히 발달된 CAM을 노출시키려면 먼저 달걀 껍질에 밝은 광원인 달걀 캔들러를 놓아 달걀 내부를 시각화합니다. 외부 및 내부 난자 껍질 막과 난자 내부의 눈에 띄는 분지 맥관 구조 사이의 공기 세포를 찾습니다. 외부에 자신의 위치를 표시하십시오.

이 지점에서 달걀 껍질에 작은 원형 구멍을 만들어 밑에 있는 흰색 껍질 막을 노출시킵니다. CAM을 방해하거나 알부민이나 혈액 누출을 일으키지 않고 두 위치에서 노출된 멤브레인을 부드럽게 뚫습니다.

계란을 세로로 유지하면서 자연 공기 셀 입구에 흡입을 가하여 내부에서 공기를 빼냅니다. 결과적인 음압은 CAM을 두 번째 구멍 아래로 낮추어 혈관 네트워크 위에 인공 공기 셀을 생성합니다.

재배치된 에어 셀의 윤곽을 그립니다. 공기 셀-CAM 경계를 방해하지 않고 윤곽선 내부에서 몇 센티미터 떨어진 달걀 껍질을 절단합니다. 절개된 껍질을 제거하여 밑에 있는 CAM과 맥관 구조를 노출시키는 큰 창을 만듭니다. 투명 필름을 사용하여 생존 가능한 난자의 창을 밀봉하십시오.

발달 7일 또는 8일째에 CAM이 완전히 발달하면 계란 회전기를 끄고 약 1-3개의 계란을 생물 안전 캐비닛의 계란 선반에 넣습니다. 조명이 꺼진 상태에서 달걀 껍질에 달걀 촛불을 놓아 달걀 한 개의 공기 셀 위치를 식별하고 표시합니다. 그런 다음 계란 캔들러를 껍질 위로 움직여 큰 혈관 네트워크를 찾고 필요에 따라 계란을 회전시킵니다.

이상적인 맥관 구조는 난자 중앙 근처에서 분기됩니다. 마커를 사용하여 이식에 사용할 맥관 구조를 추적합니다. 후드의 조명을 다시 켠 후 탄화규소 연삭석이 장착된 무선 회전 도구를 사용하여 에어 셀 중앙 바로 위의 쉘에 작은 구멍을 뚫습니다. 껍질의 대부분이 제거되었지만 흰색의 내막이 손상되지 않은 상태에서 방금 설명한 대로 혈관 창이 열릴 또 다른 작은 구멍을 뚫습니다. 두 번째 구멍이 준비되면 18게이지 바늘을 사용하여 공기 세포와 맥관 구조 위의 흰색 내막을 부드럽게 뚫고 CAM이 아닌 흰색 내막이 드릴링 영역 전체에 걸쳐 파괴되도록 주의합니다.

후드 표시등이 다시 꺼진 상태에서 계란 캔들러를 사용하여 공기 셀이 계란 끝에서 맥관 구조 위의 영역으로 옮겨졌는지 확인합니다. 필요한 경우 원래 에어 셀 위의 구멍 주위에 피펫 컨트롤러에 삽입된 진공 튜브를 놓고 짧은 버스트로 부드럽게 흡입하여 에어 셀을 움직입니다. 에어 셀의 새 위치의 윤곽을 에어-CAM 경계 내부의 약 0.5센티미터에 표시하고 새 에어 셀 위의 구멍을 덮을 수 있을 만큼 큰 포장 테이프를 고정합니다.

방금 시연한 대로 다른 두 개의 계란을 준비한 후, 계란을 인큐베이터로 되돌리고 시연된 대로 1-3개의 그룹으로 실험을 위해 추가 계란을 엽니다. 모든 계란이 열리면 공기 세포가 재배치된 계란 1-3개를 생물 안전 캐비닛의 계란 선반으로 옮기고 원형 절단 휠이 장착된 무선 회전 도구를 사용하여 CAM 또는 맥관 구조를 방해하지 않고 세포를 완전히 통해 공기 세포 경계 위에 작은 선을 절단합니다. 곡선 가위를 사용하여 남은 공기 셀 주위를 잘라 껍질에 창을 만들고 배아의 생존 가능성을 확인합니다.

생존 가능한 배아는 광범위한 맥관 구조, 투명한 알부민, 배아 움직임 및/또는 눈에 보이는 심장 박동을 나타냅니다. 생존 불가능한 배아에서 CAM은 혈관이 거의 없는 불투명하게 보일 수 있으며 배아는 움직임이나 심장 박동 없이 작거나 없을 수 있습니다. Semken 집게를 사용하여 멸균 면봉에서 작은 면화 조각을 당겨 생존 가능한 배아의 CAM 표면을 부드럽게 닦아 껍질 먼지와 부스러기를 제거합니다. 그런 다음 CAM을 건드리지 않고 6 x 7cm 투명 필름 드레싱의 1/4 조각으로 껍질 개구부를 덮고 열린 창이 위를 향하도록 계란을 인큐베이터로 되돌립니다. 계란 선반 조각, 계란 회전 장치의 가장자리 또는 다른 적절한 품목을 사용하여 계속 굴러가는 계란을 지탱하십시오.