Egg Windowing: 수정란 달걀 껍질을 열어 융모막막 혈관 구조를 노출시키는 방법

수정

된 닭고기 달걀에서 융모막 또는 CAM은 내부 달걀 껍질 막 아래에 위치한 고도로 혈관화된 층입니다. 배아 발달을 지원하는 기능을 합니다.

완전히 발달된 CAM을 노출시키려면 먼저 달걀 껍질에 밝은 광원인 달걀 캔들러를 놓아 달걀 내부를 시각화합니다. 외부 및 내부 난자 껍질 막과 난자 내부의 눈에 띄는 분지 맥관 구조 사이의 공기 세포를 찾습니다. 외부에 자신의 위치를 표시하십시오.

이 지점에서 달걀 껍질에 작은 원형 구멍을 만들어 밑에 있는 흰색 껍질 막을 노출시킵니다. CAM을 방해하거나 알부민이나 혈액 누출을 일으키지 않고 두 위치에서 노출된 멤브레인을 부드럽게 뚫습니다.

계란을 세로로 유지하면서 자연 공기 셀 입구에 흡입을 가하여 내부에서 공기를 빼냅니다. 결과적인 음압은 CAM을 두 번째 구멍 아래로 낮추어 혈관 네트워크 위에 인공 공기 셀을 생성합니다.

재배치된 에어 셀의 윤곽을 그립니다. 공기 셀-CAM 경계를 방해하지 않고 윤곽선 내부에서 몇 센티미터 떨어진 달걀 껍질을 절단합니다. 절개된 껍질을 제거하여 밑에 있는 CAM과 맥관 구조를 노출시키는 큰 창을 만듭니다. 투명 필름을 사용하여 생존 가능한 난자의 창을 밀봉하십시오.

발달 7일 또는 8일째에 CAM이 완전히 발달하면 계란 회전기를 끄고 약 1-3개의 계란을 생물 안전 캐비닛의 계란 선반에 넣습니다. 조명이 꺼진 상태에서 달걀 껍질에 달걀 촛불을 놓아 달걀 한 개의 공기 셀 위치를 식별하고 표시합니다. 그런 다음 계란 캔들러를 껍질 위로 움직여 큰 혈관 네트워크를 찾고 필요에 따라 계란을 회전시킵니다.

이상적인 맥관 구조는 난자 중앙 근처에서 분기됩니다. 마커를 사용하여 이식에 사용할 맥관 구조를 추적합니다. 후드의 조명을 다시 켠 후 탄화규소 연삭석이 장착된 무선 회전 도구를 사용하여 에어 셀 중앙 바로 위의 쉘에 작은 구멍을 뚫습니다. 껍질의 대부분이 제거되었지만 흰색의 내막이 손상되지 않은 상태에서 방금 설명한 대로 혈관 창이 열릴 또 다른 작은 구멍을 뚫습니다. 두 번째 구멍이 준비되면 18게이지 바늘을 사용하여 공기 세포와 맥관 구조 위의 흰색 내막을 부드럽게 뚫고 CAM이 아닌 흰색 내막이 드릴링 영역 전체에 걸쳐 파괴되도록 주의합니다.

후드 표시등이 다시 꺼진 상태에서 계란 캔들러를 사용하여 공기 셀이 계란 끝에서 맥관 구조 위의 영역으로 옮겨졌는지 확인합니다. 필요한 경우 원래 에어 셀 위의 구멍 주위에 피펫 컨트롤러에