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암 연구
0 조회수 • 3:26 분 • April 30th, 2023
닭 융모막(CAM)은 닭과 같은 특정 척추동물의 알에서 발견되는 고도로 혈관화된 막입니다. 이 배아 외막은 비혈관 껍질막을 감싸고 배아와 환경 사이의 기체 산소와 이산화탄소 교환 부위 역할을 합니다.
CAM 암 모델을 생성하려면 분지 맥관 구조가 노출되는 부분적으로 열린 껍질이 있는 완전히 발달된 CAM을 가진 생존 가능한 수정된 닭고기 달걀로 시작합니다. CAM이 쉘 멤브레인에서 분리되었는지 확인합니다.
멸균 논스틱 링을 혈관 분지 지점 위에 놓습니다. 유리 막대를 사용하여 링 내부의 막을 부드럽게 문질러 외부 상피층을 긁어내고 맥관 구조를 운반하는 밑에 있는 중배엽층을 노출시킵니다. 적절한 세포외 기질과 혼합된 암세포의 냉각된 현탁액을 링에 피펫팅합니다. 링은 세포 분산을 제한합니다.
매트릭스가 응고되어 내부의 세포를 고정하도록 합니다. 달걀 껍질 입구를 밀봉하고 적절한 조건에서 알을 부화시킵니다. 중배엽층 내의 조밀한 맥관 구조는 암세포에 산소와 필수 영양소를 공급하여 암세포의 성장과 확장에 적합한 미세 환경을 제공합니다.
이식을 위한 암세포 현탁액을 준비하려면 관심 있는 암세포 배양에서 세포를 수확하고 원심분리에 의해 세포를 침전시킵니다. 상청액을 흡인하고 잔류 배지에 세포를 기계적으로 재현탁합니다. 세포 현탁액을 얼음 위에 놓고 피펫을 사용하여 배지의 세포 부피를 측정합니다. 그런 후, 20 내지 100 마이크로리터의 배지에 1 내지 200만 개의 세포의 농도로 세포를 재현탁하고, 밀리리터당 2.7 내지 4 밀리그램의 세포외 기질 및 임의의 성장 인자 또는 기타 관심 첨가제를 보충한다.
암세포 이식의 경우 붙지 않는 링을 사용하여 이식할 난자를 최대 6개까지 계란 선반에 놓고 투명 필름 드레싱의 가장자리를 열린 창 쪽으로 굴려 껍질에서 필름을 제거합니다. 난자가 생존 가능하고 건강한지 확인하십시오. 이상적인 알은 열린 영역의 중앙 내에 더 작은 분지 혈관이 있는 큰 혈관을 가질 것입니다.
구부러진 홍채 겸자를 사용하여 멸균 논스틱 링을 혈관 위의 CAM 위에, 이상적으로는 분기 지점 위에 놓습니다. 멸균 유리 교반 막대를 사용하여 CAM을 부드럽게 마모시키고 암세포 현탁액을 링 중앙에 피펫팅합니다. 모든 세포가 전달되면 6 x 7cm 투명 필름 드레싱의 1/4 조각으로 개구부를 밀봉하고 적절한 임플란트 지정으로 난자에 라벨을 붙입니다. 그런 다음 껍질 개구부가 똑바로 세워지도록 계란을 인큐베이터에 단단히 넣습니다.