전립선 오가노이드 분석법(Prostate Organoid Assay): 전립선 상피 세포의 분화 능력을 연구하기 위한 매트릭스 겔 링 기반 생체 외 배양 기술

전립선 상피는 주로 기저 상피 세포와 내강 상피 세포로 구성됩니다. 기저 세포의 단층은 샘의 외부 내장을 형성하고 내강 세포 생존을 지원합니다. 반대로, 내강 세포는 내강을 감싸고 전립선 특이적 단백질을 분비합니다.

생체 외에서 전립선 상피 분화를 연구하려면 기저 전립선 상피 세포의 현탁액으로 시작합니다. 현탁액을 냉각된 기저막 매트릭스와 원하는 비율로 혼합합니다. 이 혼합물을 세포 퇴치제 배양 플레이트의 내벽 바닥 옆에 피펫팅합니다. 혼합물을 위해 플레이트를 소용돌이치게 하여 우물 둘레를 따라 고리를 형성합니다.

매트릭스가 응고될 수 있도록 플레이트를 배양합니다. 선호하는 배지로 배양을 보완합니다. 배지의 성장 인자는 기저 상피 세포의 증식을 지원합니다. 동시에, 배양 접시의 세포 퇴치성 특성은 세포 부착을 방지하여 세포가 매트릭스 내에서 3D 스페로이드를 형성하도록 장려합니다.

시간이 지남에 따라 스페로이드는 다층 상피로 경계를 이루는 내강을 발달시킵니다. 내강 내장 기저 상피 세포는 결국 분화하여 분비 내강 세포를 형성하여 3D 선 구조를 생성합니다.

텍스트 프로토콜에 설명된 대로 마우스 기저 및 내강 전립선 상피 세포의 준비로 이 절차를 시작합니다. 500마이크로리터의 마우스 오가노이드 배지로 세포 펠릿을 세척합니다. 그런 다음 마이크로리터당 1,000개 세포의 세포 밀도로 펠릿을 재현탁합니다. 마스터 믹스를 준비하려면 마우스 오가노이드 배지에 현탁된 상피 세포를 매트릭스 겔과 혼합하여 배지에 25% 세포와 75% 매트릭스 겔을 포함하는 최종 혼합물을 생성합니다. 다운스트림 응용 분야에 따라 기저 세포는 일반적으로 80마이크로리터당 100 내지 2,000개 세포의 농도로 도금되는 반면, 내강 세포는 80마이크로리터당 2,000 내지 10,000개 세포의 농도로 도금됩니다.

각 세포 혼합물에 대해 24웰 플레이트의 웰당 80마이크로리터의 매트릭스 겔을 추가합니다. 폴리-HEMA 코팅과의 직접적인 접촉을 피하면서 웰 벽의 아래쪽 절반에 물방울을 피펫팅합니다. 매트릭스 겔을 첨가한 후, 매트릭스 겔 세포 혼합물이 웰 가장자리 주위에 링을 형성하도록 플레이트를 소용돌이칩니다. 24웰 플레이트를 섭씨 37도 5% CO2 인큐베이터에 오른쪽이 위로 향하게 하여 10분 동안 넣어 매트릭스 겔이 부분적으로 경화

되도록 합니다.

10분 동안 배양한 후 24웰 플레이트를 거꾸로 뒤집고 매트릭스 겔이 완전히 경화되도록 추가로