단일 세포 샘플링이란 무엇인가요?

단일 세포 샘플링은 더 큰 집단에서 개별 세포를 분리하여 상세한 분석을 위해 사용되는 기술입니다.

단일 세포를 분리하는 것이 왜 중요한가요?

단일 세포를 분리하면 연구자가 집단 내 개별 세포의 이질성과 특정 특성을 연구할 수 있습니다.

이 기술에 필요한 장비는 무엇인가요?

단일 세포를 분리하기 위해서는 마이크로매니퓰레이터와 마이크로유리관 팁이 장착된 현미경이 필수입니다.

분리된 세포는 어떻게 저장됩니까?

분리된 세포는 일반적으로 추가 분석을 위해 수집 버퍼에 얼음 위에 저장됩니다.

분리된 세포에 어떤 유형의 분석을 수행할 수 있습니까?

분리된 세포는 세포의 특성과 행동을 이해하기 위한 게놈, 단백질체 및 기타 분자 분석에 사용될 수 있습니다.

Micromanipulation을 사용한 단일 세포 샘플링: 암세포 현탁액에서 단일 세포를 분리하는 기술

JoVE Encyclopedia of Experiments

Cancer Research

0 views • 2:10 min • April 30th, 2023

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단일 세포 샘플링을 사용하면 다운스트림 분석을 위해 암세포 현탁액에서 단일 살아있는 세포를 분리할 수 있습니다.

암세포 현탁액으로 분리를 시작합니다. 이 현탁액의 원하는 부피를 유리 슬라이드에 옮깁니다. 입자 이동을 줄이고 세포가 가라앉을 수 있도록 슬라이드를 잠시 동안 방해받지 않고 두십시오.

이제 미세 모세관 팁에 연결된 미세 조작기가 장착된 현미경 아래에서 슬라이드를 옮깁니다. 이 고정밀 기기는 미세한 수준에서 샘플의 세포와의 물리적 상호 작용을 용이하

게합니다.

미세모세관 팁을 단일 표적 세포에 가깝게 향하게 합니다. 흡입을 가하여 표적 세포를 미세모세관으로 모아줍니다. 이제 미세모세관을 원하는 수집 완충액이 들어 있는 튜브로 직접 옮깁니다.

미세모세관 내용물을 배출하여 포획된 단일 세포를 완충액으로 방출합니다. 추가 분석이 있을 때까지 분리된 살아있는 단일 세포를 얼음 위에 보관합니다.

미세 조작을 위해 전체 100마이크로리터의 세포 현탁액을 유리 슬라이드에 옮깁니다. 그런 다음 유리 슬라이드를 마이크로 매니퓰레이터가 장착된 현미경에 놓고 세포가 5분 동안 가라앉도록 합니다. 그런 다음 0.2밀리리터 PCR 튜브에 2마이크로리터의 세포 용해 마스터 믹스를 피펫팅하고 얼음 위에서 옮깁니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 1X 인산염 완충 식염수 1마이크로리터에 단일 세포를 수집합니다.

그런 다음 세포를 2마이크로리터의 세포 용해 마스터 믹스에 직접 옮깁니다. 데스크탑 마이크로분리기를 사용하여 3초 동안 2000 x g에서 샘플을 빠르게 회전시켜 튜브 바닥에 액체를 수집합니다.