0 조회수 • 2:10 분 • April 30th, 2023
단일 세포 샘플링을 사용하면 다운스트림 분석을 위해 암세포 현탁액에서 단일 살아있는 세포를 분리할 수 있습니다.
암세포 현탁액으로 분리를 시작합니다. 이 현탁액의 원하는 부피를 유리 슬라이드에 옮깁니다. 입자 이동을 줄이고 세포가 가라앉을 수 있도록 슬라이드를 잠시 동안 방해받지 않고 두십시오.
이제 미세 모세관 팁에 연결된 미세 조작기가 장착된 현미경 아래에서 슬라이드를 옮깁니다. 이 고정밀 기기는 미세한 수준에서 샘플의 세포와의 물리적 상호 작용을 용이하
게합니다.미세모세관 팁을 단일 표적 세포에 가깝게 향하게 합니다. 흡입을 가하여 표적 세포를 미세모세관으로 모아줍니다. 이제 미세모세관을 원하는 수집 완충액이 들어 있는 튜브로 직접 옮깁니다.
미세모세관 내용물을 배출하여 포획된 단일 세포를 완충액으로 방출합니다. 추가 분석이 있을 때까지 분리된 살아있는 단일 세포를 얼음 위에 보관합니다.
미세 조작을 위해 전체 100마이크로리터의 세포 현탁액을 유리 슬라이드에 옮깁니다. 그런 다음 유리 슬라이드를 마이크로 매니퓰레이터가 장착된 현미경에 놓고 세포가 5분 동안 가라앉도록 합니다. 그런 다음 0.2밀리리터 PCR 튜브에 2마이크로리터의 세포 용해 마스터 믹스를 피펫팅하고 얼음 위에서 옮깁니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 1X 인산염 완충 식염수 1마이크로리터에 단일 세포를 수집합니다.
그런 다음 세포를 2마이크로리터의 세포 용해 마스터 믹스에 직접 옮깁니다. 데스크탑 마이크로분리기를 사용하여 3초 동안 2000 x g에서 샘플을 빠르게 회전시켜 튜브 바닥에 액체를 수집합니다.
본 논문은 불균질한 세포 현탁액으로부터 단일 세포를 분리하여 후속 단일 세포 분석을 가능하게 하는 정밀한 기술을 선보입니다. 이 프로토콜은 마이크로매니퓰레이터와 마이크로모세관 시스템을 사용하여 개별 생세포를 물리적으로 선택하고 전이함으로써, 추가적인 게놈 또는 분자적 특성 분석을 수행할 수 있게 합니다.
단일 세포 마이크로조작을 통해 개별 암세포를 정밀하게 분리함으로써 고해상도의 하위 분자 분석이 가능해집니다. 이러한 역량은 세포의 이질성을 분석하고 초기 발견 및 중개 연구에서의 예측 신뢰도를 높이는 데 매우 중요합니다. 이러한 정밀 분리 기술을 R&D 워크플로우에 통합함으로써 타겟 검증을 강화하고 위험 조정 포트폴리오 의사결정을 최적화할 수 있습니다.
이 미세조작 기술은 초기 발견과 전임상 연구의 접점에 위치하며, 불균일한 암세포 부유액으로부터 단일 세포 분석을 가능하게 합니다.
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마지막 업데이트: 29 8월 2026