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암 연구
0 조회수 • 3:28 분 • April 30th, 2023
암세포의 화학 내성을 평가하려면 먼저 멀티웰 플레이트를 복용하십시오. 원하는 약물 민감성 전립선암 세포의 현탁액을 몇 개의 웰에 시드하고 세포의 약물 내성 변이체의 현탁액을 나머지 웰에 시드합니다.
배양 플레이트에 세포가 부착될 수 있도록 배양액을 배양합니다. 선택한 약물 용액의 다양한 용량 증가로 두 세포 유형을 모두 처리합니다. 약물 분자는 민감한 세포에 들어가 가장 낮은 농도에서도 세포 사멸을 일으킵니다. 그러나 내성 세포는 특수한 약물 유출 펌프를 통해 약물 분자를 배출하여 더 높은 약물 농도에 노출되었음에도 불구하고 생존을 가능하게 합니다.
파편과 약물 용액이 포함된 사용한 배지를 흡인합니다. 신선한 약물 무함유 성장 배지를 보충하십시오. 살아남은 약물 내성 세포가 증식하고 콜로니를 형성할 수 있도록 배양합니다. 살아있는 세포 콜로니를 착색하기 위해 적절한 염색 용액을 첨가하십시오.
과도한 염료를 제거하기 위해 배양액을 세척하십시오. 각 우물에 있는 유색 식민지의 수를 세십시오. 약물에 민감한 세포가 포함된 우물에는 생존 가능한 콜로니가 거의 없습니다. 대조적으로, 약물 내성 세포를 포함하는 웰은 더 많은 수의 콜로니를 나타냅니다. 그러나 이러한 약물 내성 세포는 약물 용량이 증가함에 따라 콜로니 수가 감소합니다.
이 절차에서는 6웰 플레이트에서 웰당 2밀리리터의 배지를 사용하여 2,000개의 세포를 플레이트합니다. 24시간 후, DU145 및 22Rv1 세포주 모두에 대해 증가하는 농도의 도세탁셀을 첨가합니다. DMSO를 최고 도세탁셀 용량에 사용되는 것과 동일한 부피의 대조군으로 하나의 웰에만 추가합니다. 72시간 후, 약물 함유 배지를 흡인하고 새로운 도세탁셀이 없는 배지를 추가합니다.
현미경으로 콜로니가 보일 때까지 플레이트를 1-2주 동안 배양합니다. 콜로니를 염색하려면 2-3밀리리터의 PBS로 부드럽게 세척하고 조직 배양 후드 또는 흄 후드 내부에서 2-3밀리리터의 크리스탈 바이올렛 용액과 함께 20분 동안 배양합니다.
그런 다음 염색액을 제거하고 2-3밀리리터의 물로 플레이트를 씻습니다. 그런 다음 물을 제거하고 접시를 자연 건조시킵니다. 그림 표현을 위해 플레이트의 디지털 이미지를 촬영합니다. 웰을 시각화하고 마커 펜을 사용하여 콜로니를 수동으로 계산하여 결과를 분석하고 그래프에서 세포 생존율의 백분율을 나타냅니다.