JoVE 실험 백과사전
암 연구
0 조회수 • 4:00 분 • April 30th, 2023
탄성 섬유 염색은 복막 탄성층 또는 중피하 탄성 조직을 넘어서는 암세포 침범을 검사하는 데 도움이 됩니다.
시작하려면 처리된 조직 절편에 과망간산칼륨 용액을 첨가한 다음 옥살산에 담급니다. 과망간산칼륨-옥살산 조합의 강력한 산화 특성은 조직 절편에서 천연 색소를 표백하여 탄성 섬유 형태를 모호하게 하여 염색 과정에 대한 간섭을 방지합니다.
슬라이드를 물과 에탄올로 헹구어 잔류 표백제를 제거합니다. 다음으로, 철-헤마톡실린 복합체를 포함하는 엘라스틴 염색에서 표본을 배양합니다. 주요 탄성 섬유 성분인 엘라스틴은 철-헤마트실린 복합체에 강한 친화력을 가지고 있습니다.
슬라이드를 에탄올과 물로 세척하여 잔여 얼룩을 제거합니다. 마지막으로 피크르산과 폰소 S를 함유한 대조염색으로 표본을 처리합니다. 더 작은 피크르산 분자는 모든 유형의 조직에 침투하지만 밀착된 질감의 근육과 암세포에 의해 단단히 유지됩니다. 대조적으로, 더 큰 Ponceau S 분자는 다공성 질감의 콜라겐에서 피크르산을 대체하여 콜라겐이 근육 및 암세포와 다르게 염색되도록 합니다.
현미경으로 관찰하면 탄성 섬유가 청흑색 필라멘트로 나타납니다. 콜라겐은 붉게 물들고 근육과 암세포는 노랗게 보입니다. 청흑색 탄성층을 관통하는 노란색 암세포는 전이성 침범을 확인합니다.
먼저 티슈 페이퍼를 사용하여 슬라이드나 티슈 주변의 여분의 용액을 닦아냅니다. 슬라이드를 실내 온도와 습도와 일치하는 조건에 놓습니다. 각 슬라이드에 과망간산칼륨 몇 방울을 첨가하여 산화시키고, 추가된 부피가 각 슬라이드의 조직 절편을 덮기에 충분한지 확인합니다. 5분 후, Coplin 용기에 담긴 증류수로 산화된 슬라이드를 헹구고 두세 번 헹굼을 반복하고 헹굼할 때마다 새 물병을 사용합니다. 조직은 관찰 가능한 갈색을 가져야 합니다.
이제 각 슬라이드에 옥살산 몇 방울을 추가하여 표백하고 추가된 부피가 각 슬라이드의 조직 절편을 덮을 만큼 충분한지 확인합니다. 5분 후 표백제 슬라이드를 증류수로 헹구고 헹굼을 두세 번 반복하고 헹굼할 때마다 새 물병을 사용합니다. 슬라이드를 95% 알코올로 잠깐 씻으십시오.
세척된 슬라이드를 엘라스틴 용액에 8-24시간 동안 담급니다. 그런 다음 슬라이드를 95% 에탄올에 직접 1-2분 동안 담가 각 조직 절편을 잘 구별합니다. 증류수로 슬라이드를 완전히 헹굽니다.
청흑색 탄성 섬유 염색과 회색 배경이 있는지 현미경으로 확인하십시오. 후속 Van Gieson의 대변염색도 탄성 염색을 어느 정도 추출할 수 있으므로 조직을 약간 과소 구별하는 것이 좋습니다.
Van Gieson 용액에 슬라이드를 1분 동안 대계염색하여 사용된 부피가 각 슬라이드의 조직 절편을 완전히 덮을 수 있을 만큼 충분한지 확인합니다. 다음으로, 95% 에탄올을 조직 절편에 몇 초 동안 빠르게 떨어뜨려 각 조직 절편을 잘 구별합니다.