절편을 위한 근육 조직의 스냅 동결: 급속 동결된 쥐 근육 조직의 초박형 절편을 얻기 위한 프로토콜

0 조회수3:30 • April 30th, 2023

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스냅 냉동은 조직 표본을 초저온 온도로 급속 냉동하는 기술입니다. 이는 조직 내부의 DNA, RNA 및 단백질의 기본 구조를 유지하는 데 도움이 됩니다.

사지 근육을 급속 동결하려면 먼저 쥐의 뒷다리에서 새로 추출한 근육 조직을 채취하십시오.

다음으로, 스티로폼 상자에 액체 질소를 넣고 전도성이 높은 액체인 이소펜탄이 들어 있는 비커를 액체 질소에 담그십시오.

용액이 점성이 될 때까지 이소펜탄을 얼립니다. 동시에 코르크 조각 위에 액체 냉동 매체 한 방울을 바르십시오.

힘줄을 잡고 뒷다리 근육 조직을 배치하고 조직 조각을 액체 동결 매체에 수직으로 삽입합니다. 이 방향은 근육의 단면적을 나중에 결정하는 데 도움이 됩니다.

근육 조직이 부착된 코르크 조각을 미리 식힌 이소펜탄 욕조에 잠깐 담그십시오. 이는 근육 조직을 빠르고 균일하게 동결시키는 데 도움이 됩니다.

동결 매체는 저온에서 응고되어 근육 조직 주위에 젤라틴 층을 형성하여 제자리에 고정합니다. 근육 블록을 냉동 마이크로톰에 넣어 얇게 얇게 썬 절편을 얻습니다.

편을 유리 슬라이드에 놓고 추가 조직학적 분석을 위해 더 낮은 온도에서 보관합니다.

모든 근육이 수집되면 이소펜탄이 들어 있는 플라스틱 50밀리리터 비커의 아래쪽 절반을 액체 질소에 담급니다. 이소펜탄이 비커 내부에 단단한 흰색 라미네이트 라이닝이 보이면서 약간 점성이 생기면 척에 포매 배지 몇 방울을 붓습니다.

그런 다음 힘줄로 근육을 집어 들고 신선한 근육의 끝을 포매 매립 매체 위에 조심스럽게 배치하여 코르크를 기준으로 수직으로 잡습니다. 그런 다음 근육을 수직으로 유지하면서 척과 부착된 근육을 조직이 완전히 얼 때까지 7-15초 동안 이소펜탄 욕조에 담그십시오. 잘 얼린 표본은 백악질의 흰색으로 나타납니다. 그런 다음 근육을 검체 튜브에 넣어 섭씨 영하 80도에서 즉시 보관합니다.

샘플의 RNA와 효소 구조 및 활성을 보존하려면 추출 후 가능한 한 빨리 근육 조직을 동결

해야 합니다.

얼어붙은 근육 조직을 절편하려면 먼저 극저온 조절기 내부 챔버의 작동 온도를 섭씨 영하 23도로 설정합니다. 섭씨 영하 80도의 시편을 몇 시간 동안 작동 온도에 적응시키십시오. 그런 다음 장착 축에 수직인 근육의 중복부 영역에서 시편의 8미크론 두께의 여러 부분을 얻고 절단될 때 실온 유리 슬라이드에 섹션을 수집합니다. 모든 섹션이 수집될 때까지 샘플을 극저온 조절기 챔버 내부에 보관하십시오. 그런 다음 추가 분석이 있을 때까지 샘플을 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026