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암 연구
0 조회수 • 3:26 분 • April 30th, 2023
세포에서 특정 RNA 서열을 검출하려면 먼저 유리 슬라이드에서 조직 절편을 채취합니다. 표적 RNA 프로브를 포함하는 적절한 혼성화 완충액으로 조직 절편을 오버레이합니다.
이들 프로브는 한쪽 끝에 표적 인식 부분이 있고 다른 쪽 끝에 꼬리 서열이 있는 Z자형 RNA 분자입니다. 스페이서 암은 이 두 끝을 연결합니다.
이제 슬라이드를 최적의 온도에서 하이브리드화 오븐에서 배양합니다. Z자형 RNA 프로브는 세포에 들어가 해당 표적 mRNA 서열과 쌍으로 혼성화합니다.
오븐에서 슬라이드를 제거합니다. 슬라이드를 세척액에 담그고 결합되지 않은 프로브와 과도한 혼성화 완충액을 제거합니다.
그 후, 프리 앰프 용액을 추가하고 배양합니다. 프리앰프 분자는 인접한 두 개의 Z 프로브의 꼬리 시퀀스에 부착됩니다. 이 분자는 단일 Z 프로브에 결합하지 않아 특이성을 보장합니다.
다음으로, 증폭기 시약 혼합물을 추가하고 배양합니다. 여러 증폭기 분자가 단일 전치 증폭기 시퀀스에 혼성화됩니다.
마지막으로, 원하는 라벨링 프로브로 조직 절편을 라벨링하여 세포에 특정 RNA 서열의 존재를 감지합니다.
하이브리드화를 시작하려면 슬라이드를 탭하고 튕겨 여분의 액체를 제거하고 슬라이드 랙에 다시 놓습니다. 예열된 HPV 프로브를 오븐에서 꺼내고 약 4방울을 추가하여 각 섹션을 완전히 덮습니다. 트레이를 뚜껑으로 덮고 섭씨 40도에서 2시간 동안 오븐에 넣습니다. 배양이 완료되면 오븐에서 트레이를 제거하고 슬라이드 랙을 제거합니다.
한 번에 하나의 슬라이드, 여분의 액체를 빠르게 제거하고 슬라이드를 1x 세척 완충액으로 채워진 염색 접시에 담근 슬라이드 랙에 놓고 슬라이드를 실온에서 2분 동안 세척하면서 일정하게 교반한 다음 신선한 1x 세척 완충액으로 반복합니다. 탭하고 튕겨 슬라이드에서 여분의 액체를 제거하고 슬라이드 랙에 다시 놓습니다. 각 섹션을 완전히 덮기 위해 섹션당 약 4방울의 실온 AMP1을 추가합니다. 트레이를 뚜껑으로 덮고 섭씨 40도에서 오븐에 30분 동안 넣습니다.
오븐에서 트레이를 제거한 후 슬라이드 랙을 제거합니다. 한 번에 하나의 슬라이드를 작업하면서 여분의 액체를 빠르게 제거하고 슬라이드를 1x 세척 완충액으로 채워진 염색 접시에 담근 슬라이드 랙에 놓고 실온에서 2분 동안 세척하면서 일정하게 교반한 다음 신선한 1x 세척 완충액으로 반복합니다.