RNA CISH 신호 감지: 온전한 조직 표본에서 RNA 현장 혼성화 중 발색 신호를 감지하는 기술

RNA 혼성화 중 발색 신호를 검출하려면 유리 슬라이드에서 조직 절편을 채취하는 것부터 시작합니다. 이 섹션에는 양 고추냉이 과산화효소 표지 RNA 프로브와 사전 혼성화된 표적 RNA가 포함되어 있습니다.

조직 절편에 검출 기질인 디아미노벤지딘 또는 DAB 몇 방울을 분배하고 배양합니다.

DAB가 세포에 들어가면 양 고추냉이 과산화효소가 세포를 산화시켜 갈색 침전물을 형성합니다. 이 반응은 세포의 특정 RNA 서열에 갈색을 부여합니다. 표적 RNA를 포함하지 않는 세포는 과산화효소 활성이 없으며 염색되지 않은 상태로 유지됩니다.

다음으로, 조직 절편을 헤마트실린으로 역조염색합니다. 헤마트실린은 DNA에 결합하여 조직 절편에 보라색 염색을 부여합니다.

조직 절편을 암모니아 물 - 블루잉 용액으로 처리하십시오. 보라색 얼룩의 강도를 줄여 세포를 파란색으로 보이게 합니다. 이 단계는 세포 내부의 갈색 반점을 명확하게 시각화하는 데 필수적입니다.

이제 조직 절편을 증가된 농도의 에탄올에 담근 다음 유기 용매인 자일렌으로 처리합니다. 이러한 단계는 더 나은 이미지를 얻기 위해 조직 절편을 탈수합니다.

마지막으로 장착 용액과 커버슬립으로 슬라이드를 밀봉하고 광학 현미경으로 시각화합니다. 세포는 표적 RNA의 존재를 나타내는 점상 갈색 점을 나타냅니다.

적절한 크기의 튜브에 동일한 수의 각 DAB-A 및 DAB-B 용액을 분배하여 섹션당 약 120마이크로리터의 DAB 기판을 만들고 소용돌이를 만듭니다. 슬라이드 선반에서 각 슬라이드를 한 번에 하나씩 꺼내 탭하고 튕겨 여분의 액체를 제거한 다음 슬라이드 선반에 다시 놓습니다. 약 120마이크로리터의 DAB 혼합물을 각 조직 절편에 피펫팅하여 절편이 덮여 있는지 확인합니다. 실온에서 10분 동안 배양하고 대계염색을 진행합니다.

유리 슬랫당 마운팅 매체 한 방울을 떨어뜨린 다음 슬랫을 슬라이드 위에 놓고 자연 건조시킵니다. 몇 시간 후, 원고에 설명된 대로 광학 현미경을 사용하여 평가를 진행합니다.

• Chromogenic In Situ Hybridization (CISH) - Technique for detecting RNA or DNA sequences.
• Diaminobenzidine (DAB) - Detection substrate used in CISH testing.
• Horseradish Peroxidase - Enzyme that oxidizes DAB during RNA hybridization.
• Hematoxylin - Stain that binds to DNA during CISH technique.
• Chromogenic Materials - Substances that produce a colour when exposed to radiation.

• Introduce CISH - It's a molecular technique for detecting specific sequences of DNA or RNA (e.g., CISH testing).
• Key Concepts - Horseradish peroxidase oxidizes DAB to create a signal (e.g., CISH technique).
• Underlying Mechanisms - Staining and de-staining processes reveal target RNA (e.g., CISH staining).
• Connect to Experiment - Signals seen under microscope confirm presence of target RNA.

• What is CISH and how does it enable RNA and DNA detection?
• How does the oxidation of DAB works in the CISH technique?
• Why is the staining and de-staining process critical for the CISH procedure?

• Practical Applications - CISH testing aids in disease diagnostics (e.g., biomedical research).
• Industry Impact - Developments in diagnostic techniques (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improves disease detection rates (e.g., public health).
• Link to Scientific Advancements - Continued innovation in chromogenic materials and techniques.