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암 연구
0 조회수 • 3:03 분 • April 30th, 2023
특정 전이성 암에서 종양 세포는 기원 부위에서 멀리 확장되어 신경 조직을 관통하는데, 이를 신경주위 침범 또는 PNI라고 합니다.
PNI는 인간 상피 조직의 기저막을 모방하는 융모막 또는 CAM 표면의 난자에서 입증될 수 있습니다.
시작하려면 껍질이 부분적으로 열린 생존 가능한 수정된 닭고기 달걀을 가져와 완전히 발달한 CAM을 노출시킵니다.
다음으로, 마우스의 척수에서 후근 신경절 또는 DRG를 분리합니다. DRG는 암세포가 신경주위 공간을 침범하는 감각 뉴런 클러스터입니다.
DRG를 형광 염료와 함께 적절한 배지에서 배양하여 쉽게 시각화할 수 있도록 라벨을 붙입니다. 이제 멤브레인을 파열시키지 않고 DRG를 CAM 표면으로 옮깁니다.
미생물 오염을 방지하기 위해 계란을 투명 필름으로 덮으십시오. 그런 다음 DRG를 CAM에 쉽게 통합하기 위해 알을 부양합니다.
배양 후, DRG에서 멀리 떨어진 CAM의 건조한 표면에 형광 표지된 암세포를 시드합니다. 건조한 표면은 암세포의 확산을 최소화하고 규칙적인 종양 형성을 허용합니다.
달걀 껍질 개구부를 밀봉하고 배양하여 DRG-암세포 상호 작용을 허용합니다. 현미경으로 암세포가 생착된 DRG를 향해 자라는 것을 관찰할 수 있어 PNI를 입증합니다.
후근 신경절을 융모막에 이식하려면 미세하고 멸균된 겸자를 사용하여 배양 접시에서 하나의 신경절을 조심스럽게 잡고 신선한 HBSS 용기에 조직을 부드럽게 씻습니다. 신경절을 계란 하나의 융모막에 놓고 막에 구멍이 뚫리지 않도록 주의하고 모든 난자 입구를 멸균 투명 필름 드레싱으로 덮습니다. 모든 난자가 접목되면 순환 없이 2일 동안 가습 계란 인큐베이터에 돌려줍니다.
부화가 끝나면 계란을 층류 캐비닛으로 옮기고 가위와 집게를 사용하여 투명 필름 드레싱을 엽니다. 다음으로, 5마이크로리터의 HBSS에 0.5-100만 개의 형광 표지된 종양 세포를 각 후근 신경절에서 약 2mm 떨어진 각 난자의 융모막 알란토막에 추가하여 신경절과 세포 사이의 거리를 균일하게 유지합니다. 그런 다음 계란을 새 필름 드레싱으로 덮고 계란을 회전 없이 7일 동안 계란 인큐베이터에 다시 넣습니다.
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