0 조회수 • 2:24 분 • April 30th, 2023
융모막 또는 CAM은 온전한 난자의 내껍질막에 밀접하게 부착되는 배아외막입니다. CAM은 자연적으로 면역결핍되고 혈관이 고도로 형성된 막이기 때문에 종양 이식 및 모델링에 이상적인 시스템입니다.
종양을 함유한 CAM을 수확하려면 먼저 이전에 종양과 함께 이식된 완전히 발달된 CAM을 가진 생존 가능한 수정 닭 달걀을 채취합니다. CAM에 파라포름알데히드를 추가합니다. 파라포름알데히드는 막 단백질을 가교하여 막을 더 단단하게 만들어 수확을 용이하게 합니다.
다음으로, 계란 주위를 잘라 달걀 껍질의 윗부분을 계란의 나머지 부분과 분리하고, 종양 함유 CAM은 제거된 껍질에 계속 부착되어 있습니다. CAM의 한쪽 가장자리를 잡고 들어 올려 달걀 껍질에서 부드럽게 분리합니다.
그 후, 수확한 CAM을 종양 이식편이 위쪽을 향하도록 파라포름알데히드에 놓습니다. 파라포름알데히드는 CAM 및 종양 이식편의 형태를 보존하여 다양한 다운스트림 분석을 위해 수확된 멤브레인을 준비합니다.
부화가 끝나면 알을 실험실 벤치탑에 놓습니다. 주사기를 사용하여 각 계란의 필름 드레싱에 구멍을 뚫고 각 융모막에 약 300마이크로리터의 4% 파라포름알데히드를 도포하여 수확 과정을 용이하게 하기 위해 조직을 약간 단단하게 합니다.
가위를 사용하여 융모막이 부착된 달걀 껍질의 위쪽 절반을 제거합니다. 껍질의 크기를 직경 약 3cm로 줄이고, 후근 신경절과 종양 세포가 이식된 융모막 부분을 껍질 조각의 중앙 내에 유지합니다. 그런 다음 미세한 집게로 융모막을 잡고 달걀 껍질에서 조직을 분리하여 웰당 2밀리리터의 4% 파라포름알데히드가 들어 있는 6웰 플레이트의 한 웰로 옮깁니다.