miRNA 억제제를 사용한 종양내 치료 모델링: 쥐 모델에서 종양 성장에 대한 miRNA 억제제의 효과를 분석하는 방법

miRNA 억제제는 내인성 miRNA에 결합하여 그 활성을 억제하는 화학적으로 변형된 작은 단일 가닥 RNA 분자입니다.

miRNA 억제제를 사용한 종양내 치료의 효과를 모델링하려면 생물발광 효소 태그가 부착된 암세포의 현탁액을 복용하는 것부터 시작합니다. 암세포 현탁액에 액화된 기저막 매트릭스를 첨가합니다.

결과 혼합물을 주사기에 넣습니다. 면역결핍 누드 마우스의 왼쪽 옆구리에 피하 주사합니다. 암세포가 성장하여 종양을 형성하도록 하십시오.

동시

에, miRNA 억제제 용액이 들어 있는 튜브에 생체 내 전달제인 지질 나노입자를 첨가하여 치료 혼합물을 준비합니다. miRNA 억제제를 지질 나노입자에 캡슐화할 수 있도록 처리 혼합물을 배양합니다.

치료 혼합물을 종양에 직접 주입합니다. 지질 나노입자는 종양 세포 내부에 miRNA 억제제를 전달합니다. 일단 내부로 들어가면 miRNA 억제제는 특정 발암성 miRNA에 결합하여 표적 mRNA에 혼성화되는 것을 방지합니다. 이것은 암세포의 사멸로 이어집니다.

마지막으로, 생물발광 기질 용액을 마우스에 피하 주입합니다. 생물발광 효소가 있는 경우 암세포의 기질은 후속 발광과 함께 산화됩니다.

생물발광 이미징 챔버를 사용하여 마우스를 시각화합니다. 종양 내 주사된 miRNA 억제제는 마우스에서 종양 성장을 유의하게 억제합니다.

완전 배지에 Cal62 인간 갑상선암 세포주를 확립한 후, 섭씨 4도에서 50마이크로리터의 PBS에 1배 10 내지 6번째 세포 분취량을 현탁시키고 세포를 동일한 부피의 기저막 매트릭스와 혼합합니다.

27G 1/2" 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기에 세포를 로드하고 100마이크로리터의 샘플을 6주 된 면역결핍 BALB/c 누드 마우스의 왼쪽 옆구리에 피하 주입합니다. 주사 2주 후, antagomiR 또는 대조군 처리 완충 용액을 1.5밀리리터 튜브에 실온 생체 내 전달 시약 160마이크로리터에 첨가하고 즉시 용액을 10초 동안 소용돌이치게 하여 혼합물의 복합화를 보장합니다.

처리 용액을 섭씨 50도에서 30분 동안 배양한 후 미세 원심분리기에서 잠시 원심분리합니다. 그런 다음 침전된 치료 복합체를 신선한 PBS로 6배 희석하고 철저히 혼합한 후 전체 200마이크로리터 부피의 치료제를 종양에 직접 주입합니다.

밀리리터당 40밀리그램의 D-루시페린 기질 용액 50마이크로리터를 각 실험 동물에 일주일에 두 번 피하 주입하여 이소플루란 마취 후 발가락 꼬집