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암 연구
0 조회수 • 2:22 분 • April 30th, 2023
극저온 밀링 또는 극저온 밀링은 탈세포화된 조직 표본을 극도로 낮은 온도로 냉각하고 생화학적 조성을 유지하면서 미세한 분말로 분쇄할 수 있는 기술입니다.
시작하려면 동결건조된 조직 유래 탈세포화된 세포외 기질 또는 관심 있는 ECM을 얻습니다. 작은 조각을 얻으려면 다진다.
다음으로, 다진 ECM 조각을 밀링 용기로 옮깁니다. 밀링 용기에 밀링 볼을 넣습니다. 로드된 밀링 용기를 액체 질소에 담가 샘플을 -196°C에서 얼립니다.
냉각된 용기를 극저온 밀링 시스템에 넣습니다. 냉동 샘플을 원하는 기간 동안 적절한 빈도로 냉동 밀링합니다.
크라이오밀링 중에 밀링 용기는 수평 위치에서 방사형으로 진동합니다. 결과적으로 밀링 볼의 관성은 용기의 둥근 끝에서 높은 에너지로 냉동 샘플에 충격을 가하여 분쇄하는 것을 용이
하게 합니다.또한 밀링 볼의 움직임과 결합된 밀링 용기의 움직임은 샘플의 집중적인 혼합을 촉진하여 균일한 입자 크기 분포를 가진 미세 분말을 얻습니다.
이제 냉동 분쇄된 ECM 분말을 유리 바이알에 옮깁니다. 습기에 노출되지 않도록 바이알을 단단히 밀봉하십시오. 더 사용할 때까지 샘플을 건조시킵니다.
날카로운 수술용 가위를 사용하여 탈세포화된 조직을 잘게 자릅니다. 가공된 조직을 냉동 분쇄하려면 다진 동결건조 ECM으로 실험실 볼 밀 시스템용 25밀리리터 스테인리스 스틸 밀링 챔버를 채우고 10mm 스테인리스 스틸 밀링 볼 2개를 추가합니다.
로드된 밀링 챔버를 닫고 액체 질소에 3분 동안 완전히 담그십시오. 그런 다음 냉동 샘플을 30Hz에서 3분 동안 분쇄합니다. ECM이 미세한 분말로 분쇄될 때까지 액체 질소에 담그고 밀링을 반복합니다.