동결 건조를 통한 세포외 매트릭스 유래 폼 제작: 탈세포화된 조직의 ECM에서 생물학적 골격을 생성하는 절차

0 조회수2:31 • April 30th, 2023

ECM 유래 폼은 조직 미세 환경의 비세포 구성 요소인 세포외 기질을 사용하여 얻은 다공성 스캐폴드입니다.

ECM 유래 폼을 제조하려면 먼저 튜브에 초미세 ECM 분말의 균질한 현탁액을 취하십시오. ECM 응집을 방지하기 위해 일정한 교반과 함께 따뜻한 온도에서 현탁액을 배양합니다.

그런 다음 주사기를 사용하여 액화된 ECM 현탁액을 원하는 금형으로 옮깁니다. ECM이 굳을 때까지 금형을 밤새 냉장 보관합니다. ECM은 응고되어 3차원 네트워크 구조를 형성합니다.

마지막으로 고체 ECM 함유 금형을 동결건조기 플라스크에 넣습니다. 플라스크를 동결 건조기 시스템에 연결합니다. 동결건조기 내부에서 샘플은 초저온 및 저압에 노출됩니다. 그 결과 ECM 네트워크의 틈새 공간에 얼음 결정이 형성됩니다.

적절한 시기에 동결건조기의 압력과 온도가 점차 상승합니다. 이러한 조건은 고체가 녹지 않고 기체 형태로 직접 변환되는 과정인 승화를 촉진합니다.

기체 증기가 증발하여 ECM 네트워크 내부에 빈 공간을 남겨 다공성 ECM 파생 스캐폴드를 생성합니다.

탁액이 따뜻해질 때까지 120rpm에서 계속 교반하면서 ECM 현탁액을 섭씨 37도에서 배양합니다. 그런 다음 0.2몰 아세트산을 사용하여 샘플 현탁액을 원하는 농도로 희석합니다. 3밀리리터 주사기와 18G 바늘을 사용하여 원하는 금형에 ECM 현탁액을 채웁니다.

폼은 금형의 모양에 따라 다양한 형상으로 제작할 수 있습니다. 틀을 덮고 섭씨 영하 20도 또는 영하 80도에서 얼립니다. 그런 다음 금형을 동결건조 플라스크에 넣습니다. 플라스크를 실험실 동결 건조기 시스템에 연결하고 금형을 24시간 동안 또는 완전히 건조될 때까지 건조합니다.