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암 연구
0 조회수 • 4:33 분 • April 30th, 2023
특정 조직의 세포외 기질에서 파생된 탈세포화된 스캐폴드는 고유의 세포외 미세 환경을 모방합니다. 이러한 스캐폴드는 구조적 무결성과 생화학적 구성을 유지하고 조직 공학을 위한 유망한 플랫폼 역할을 합니다.
탈세포화된 돼지 식도 스캐폴드를 준비하려면 갓 절제한 돼지 식도부터 시작하십시오. 식도를 세로로 이등분하고 적절한 완충액으로 헹구어 잔해물을 제거합니다. 다음으로, 가장 안쪽 층인 점막 표면이 위를 향하도록 식도를 고정합니다.
식도의 한쪽 끝에 있는 밑에 있는 점막하층에서 점막을 분리합니다. 고유층이라고 하는 점막의 느슨한 결합 조직을 따라 식도를 세로로 해부하여 점막 표면을 밑에 있는 점막하층에서 완전히 분리합니다.
또한, 점막하샘의 밀도가 더 높고 고유층이 더 두꺼운 점막의 근위 및 원위 영역을 절제합니다. 점막 조직을 균일한 크기로 자릅니다.
항생제가 보충된 고장성 식염수로 조직을 치료하십시오. 항생제는 박테리아 성장을 예방하는 데 도움이 됩니다. 용질 농도가 높으면 물이 세포에서 빠져나와 수축을 일으킵니다. 이 단계는 세포 사멸 및 세포외 기질로부터의 분리를 더욱 돕습니다.
이제 느슨해진 상피를 아래 조직에서 부드럽게 분리합니다. 세포 파편을 제거하기 위해 완충액으로 조직을 헹구십시오. 마지막으로, 조직을 글리세롤에 배양하면 기저막의 무결성을 보존하면서 세포를 탈수 및 용해하여 조직 탈세포화를 더욱 촉진합니다.
탈세포화된 돼지 식도 스캐폴드를 준비하려면 먼저 가위와 핀셋을 사용하여 돼지 식도를 세로로 자릅니다. 다음으로, 멸균 PBS 100밀리리터가 들어 있는 180밀리리터 멸균 냄비에 식도를 10분 동안 부드럽게 흔들어 잔해물을 제거합니다.
조직을 헹구는 동안 코르크 해부 보드에 70% 에탄올을 뿌립니다. 코르크가 마르면 점막면이 위로 향하도록 식도를 보드에 고정합니다. 이제 멸균 핀셋을 사용하여 식도 한쪽 끝의 점막 표면을 잡고 보드에서 조직을 당겨 밑에 있는 점막하층에서 점막을 분리합니다.
그런 다음 멸균 메스 칼날을 사용하여 식도를 고유층을 따라 세로로 해부하고 해부가 진행됨에 따라 핀을 제거하여 점막을 들어 올릴 수 있도록 합니다. 밑에 있는 점막하층을 버리고 메스를 사용하여 남은 점막을 5cm 정사각형으로 자릅니다. 방금 시연한 대로 부드럽게 교반하면서 150밀리리터의 멸균 PBS로 조각을 세척합니다.
5분 후, 섭씨 37도에서 항생제가 보충된 1몰 염화나트륨 용액 150밀리리터가 들어 있는 180밀리리터 냄비에 조직을 옮깁니다. 72시간 후, 조직을 150밀리리터의 멸균 PBS로 옮기면 상피가 기본 조직에서 눈에 띄게 분리되기 시작합니다.
멸균 겸자와 메스 칼날을 사용하여 분리된 상피를 제거하고 나머지 조직을 멸균 PBS 150밀리리터의 신선한 냄비에 넣고 부드럽게 교반하면서 5분 동안 세 번 세척합니다. 이제 스캐폴드를 완전히 멸균하기 위해 조직을 최소 4개월 동안 글리세롤에 보관해야 합니다.