0 조회수 • 3:14 분 • April 30th, 2023
마우스 신장의 얇은 부분을 준비하려면 먼저 갓 수확한 마우스 신장을 얻습니다. 신장을 여과지에 옮기고 건조시켜 진동 절개 표본 홀더에 최적의 접착력을 보장합니다.
다음으로, 비브라톰 표본 홀더의 바닥에 적용된 시아노아크릴레이트 접착제의 얇은 층을 사용하여 요관 쪽이 아래로 향하도록 신장을 장착하고 신장을 수직 위치에 고정합니다. 시편 홀더를 버퍼 트레이로 옮깁니다.
신장의 윗면을 완전히 담그기 위해 트레이에 적절한 완충액을 채웁니다. 슬라이스 중 열 축적으로 인한 조직 손상을 방지하기 위해 트레이를 둘러싸고 있는 얼음 욕조입니다. 진동 블레이드를 적절한 각도, 속도 및 진폭으로 설정합니다. 두께 매개변수를 조정하여 원하는 두께의 조직 절편을 얻습니다.
작동 중에 블레이드는 측면으로 진동하고 전진하여 조직 표본을 관통합니다. 진동 블레이드는 더 적은 압력으로 절편을 허용하고 조직 변형을 최소화하여 조직 형태를 유지하면서 관심 있는 균일한 신장 조직 절편을 생성합니다.
한편, 조직의 생리학적 조건을 모방하기 위해 적절한 냉각 완충 용액이 포함된 멀티웰 플레이트를 조립합니다. 이제 슬라이스된 조직 절편을 완충액으로 옮깁니다. 마지막으로, 추가 다운스트림 분석까지 조직 절편을 저온에서 보관합니다.
끝이 뭉툭한 집게를 사용하여 얼음처럼 차가운 KRB 용액에서 준비된 신장을 부드럽게 잡고 제거합니다. 즉시 신장을 흡수성 종이 위에 약 2-4초 동안 올려 과도한 외부 수분을 제거합니다. 흡수성 종이를 가로질러 신장을 부드럽게 굴려 실질의 모든 면이 건조되었는지 확인하여 신장이 진동 절개 단계에 최적으로 접착
되도록 합니다. 즉시시아노아크릴레이트 접착제를 비브라톰 표본 플레이트의 바닥에 얇게 바르고 끝이 뭉툭한 겸자를 사용하여 접착제로 덮인 부위에 요관 쪽이 아래로 향하도록 신장을 놓습니다. 집게의 평평한 가장자리로 신장 상단에 약 10-20초 동안 부드럽게 아래쪽 압력을 가하여 접착제를 건조시킵니다.
검체 플레이트를 완충 트레이 바닥에 단단히 고정하고 신장 상단이 완전히 잠기도록 KRB 용액의 수준을 조정합니다. 자동 비브라톰 절편의 경우 비브라톰 블레이드 절단 주기의 시작 및 종료 위치를 신장에서 0.5-1cm 떨어진 곳에서 선택하여 전체 신장 평면이 절편되도록 합니다.
칼날이 신장에 닿는지 확인하면서 자동 절단 과정을 시작합니다. 겸자를 사용하여 신장에서 해방된 절편을 수집하고 즉시 개별 우물로 옮깁니다.