고체상 미세추출 시료 채취: 이식편 조직에서 시료 추출을 위한 프로브 기반 기법

장기 이식편의 장기 보관은 장기 기능 및 초기 장기 거부 반응의 지표인 대사 프로필에 영향을 미칩니다.

이러한 대사산물을 분리하려면 생체 적합성 흡착제로 코팅된 얇은 고체상 미세 추출 또는 SPME 프로브를 사용하여 시작하십시오. 프로브를 하이드로알코올성 세척액에 담그고 코팅된 흡착제를 수화시키고 결합된 불순물을 느슨하게 합니다.

프로브를 저어서 불순물을 제거합니다. 그런 다음 프로브를 활성화 용액에 넣고 다시 교반합니다. 활성화 용액의 화학 물질은 프로브 표면을 수정하여 흡착 가능성을 향상시킵니다. 프로브를 물로 헹구고 멸균하여 미생물 오염 물질을 제거합니다.

이제 멸균 및 활성화된 프로브를 장기 이식편에 삽입하여 조직 매트릭스가 전체 흡착제 표면을 덮도록 합니다. 흡착제 물질은 이식편에서 자유 극성 및 비극성 대사산물을 끌어당겨 표면에 흡착할 수 있습니다. 프로브를 집어넣고 물로 헹구어 잔여 조직을 제거합니다.

그런 다음 흡착된 대사산물과 상호 작용하는 탈착 용액에 프로브를 넣습니다. 프로브를 교반하여 포획된 대사산물을 분리하고 탈착 용액으로 가용화합니다. 마지막으로, 프로브를 제거하고 후속 분석을 위해 생성된 대사산물 혼합물을 처리합니다.

1:1 메탄올과 물로 구성된 전처리 혼합물을 준비하는 것부터 시작합니다. 각 2밀리리터 유리 바이알에 용액 1밀리리터를 피펫팅하고 각 바이알에 하나의 프로브를 넣습니다. 와류 교반기에서 바이알을 1,200rpm에서 1시간 동안 교반합니다. 그런 다음 프로브를 LC-MS 등급의 물로 헹구고 표준 외과적 멸균 프로토콜에 따라 또는 멸균 처리 부서에서 멸균합니다.

샘플을 추출할 준비가 되면 멸균 포장을 열고 두 개의 프로브를 시점당 10분 동안 신장 피질에 직접 삽입하여 코팅의 전체 길이가 조직 매트릭스로 덮여 있는지 확인합니다. 각 프로브에 대한 샘플링 시간을 추적해야 합니다. 프로브를 조직에서 빼내어 집어넣고 즉시 LC-MS 등급의 물로 코팅을 헹구어 남아 있는 혈액을 제거하고 수술 부위에서

프로브를 운반하려면 별도의 바이알에 넣고 닫으십시오. 그런 다음 드라이아이스나 액체 질소로 채워진 상자에 바이알을 넣습니다. 샘플을 섭씨 영하 80도에서 보관하거나 즉시 탈착을 진행하십시오.

대사체 분석을 위해 아세토니트릴과 물로 구성된 탈착 용액과 지질체 분석을 위해 이소프로판올과 메탄올로 구성된 탈착 용액을 준비합니다. 2밀리리터 라벨이 붙은 바이알의 삽입물에 100마이크로리터의 용액을 추가하고 각 바이알에 하나의 프로브를 넣습니다. 바이알을 1,200rpm에서 2시간 동안 교반합니다. 그런 다음 바이알에서 프로브를 제거하고 LC-MS 분석을 진행합니다.