유도 만능 줄기 세포에서 인간 신장 Podocytes 도출: 줄기 세포에서 성숙한 Kidney Podocytes 의 지시된 분화를 위한 절차

성숙한 세포는 줄기 세포와 유사한 미분화 및 증식 상태를 회복하도록 재프로그래밍될 수 있습니다. 이러한 재프로그래밍된 세포를 유도만능줄기세포(IPSC)라고 합니다. 만능 세포를 신장에서 노폐물의 여과에 관여하는 족세포 특화 세포로 분화하려면 중배엽 유도 배지에 인간 IPSC의 현탁액을 복용하는 것부터 시작합니다.

이 현탁액을 기하 매트릭스 코팅 배양 플레이트에 옮기고 배양합니다. 기저 매트릭스는 베이스에서 IPSC의 접착을 용이하게 합니다. 그 후, 배지에 존재하는 특정 인자는 IPSC를 족세포의 전구체 세포인 중배엽 세포로 분화하도록 유도합니다. 사용한 매체를 흡인합니다.

원하는 부피의 중간배엽 유도 배지로 플레이트를 보충하고 장기간 배양합니다. 이 단계는 중배엽 세포를 미성숙 족세포로 분화시킵니다. 중간 중배엽 유도 배지를 트립신 용액으로 교체하여 플레이트에서 부착 세포를 해리시킵니다.

다음으로, 원심분리하여 세포를 펠릿화합니다. 트립신 용액과 매트릭스 단편을 함유한 상청액을 버립니다. 펠릿을 족세포 유도 배지에 재현탁합니다. 세포 현탁액을 신선한 코팅된 배양 플레이트로 옮깁니다. 중간 세포에서 여러 발과 같은 돌출부가 발달할 수 있도록 배양하여 성숙한 족세포를 형성합니다.

계수 후, 세포를 중배엽 유도 배지 농도의 밀리리터당 10 내지 5번째 세포로 재현탁하고 기저막 기질 2-코팅 플레이트로부터 세포외 기질 용액을 흡인합니다. 플레이트를 따뜻한 배지로 두 번 헹구고 인간 유도 만능 줄기 세포 현탁액을 부드러운 피펫팅과 혼합합니다.

기저막 매트릭스 2-코팅 12웰 플레이트의 각 웰에 1밀리리터의 세포를 추가하고 플레이트를 부드럽게 흔들어 세포를 보다 고르게 분포시킵니다. 그런 다음 플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 넣습니다. 분화 2일 내지 15일째에, 중배엽 유도 배지를 웰당 1밀리리터의 중간 중배엽 유도 배지로 교체한다.

배지의 황변에 의해 나타난 바와 같이 상당한 세포 성장 및 영양분의 급속한 고갈이 관찰되는 경우, 중간 중배엽 분화 배지의 부피는 웰당 1.3밀리리터로 증가할 수 있다. 배양 16일째에 중간 중배엽 세포를 따뜻한 배지로 헹구고 웰당 500마이크로리터의 0.05% 트립신-EDTA와 함께 세포를 섭씨 37도에서 3분 동안 배양합니다.

세포가 해리되기 시작하면 세포 리프터로 세포를 긁어내고 피펫팅으로 세포를 부드럽게 혼합합니다. 웰당 약 2밀리리터의 트립신 중화 용액으로 반응을 중지하고 세포를 50밀리리터 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 배지로 부피를 최대 50밀리리터까지 가져오고 원심분리로 세포를 수집합니다.

펠릿 및 족세포 유도 배지를 배지 농도 밀리리터당 1배 10 내지 5번째 세포로 재현탁하고 세포를 기저막 매트릭스 2-코팅 플레이트에 첨가합니다. 그런 다음 플레이트를 부드럽게 흔들어 세포가 더 고르게 분포되도록 하고 세포를 인큐베이터에 최대 5일 동안 넣습니다.

• Induced Pluripotent Stem Cells (IPSCs) - Reprogrammed mature cells with a proliferative, undifferentiated state similar to stem cells.
• Podocytes - Specialized cells involved in the filtration of waste from kidneys.
• Mesoderm Cells - Precursor cells for podocytes that are derived from IPSCs.
• Mature Podocytes - Fully developed podocytes, characterized by several foot-like projections.
• Directed Differentiation - A process of driving the development of undifferentiated cells into a specific cell type.

• Introduce Induced Pluripotent Stem Cells (IPSCs) - Cells which can be reprogrammed to regain a stem cell-like state (e.g., pluripotent).
• Key Concepts - Summarization of the steps from IPSCs to mature podocytes (e.g., directed differentiation of IPSCs, kidney mesoderm).
• Underlying Mechanisms - This involves various elements, such as media induction, cell incubation, and resuspension (e.g., deriving).
• Connect to Experiment - Understanding of how this process is valuable in studying kidney functions (e.g., podocytes kidney, normal human kidney podocytes).

• What are Induced Pluripotent Stem Cells (IPSCs) and how are they reprogrammed?
• What are podocytes and how do they function in the kidney?
• What is the process of deriving podocytes from mesoderm cells?

• Practical Applications - Generation of podocytes could be used in testing pharmaceutical effects on kidneys (e.g., kidney podocytes).
• Industry Impact - The research may offer new treatments for kidney-related diseases (e.g., human podocytes).
• Societal Importance - A better understanding of the IPSCs may revolutionize regenerative medicine (e.g., pluripotent).
• Link to Scientific Advancements - The evolution of technology that could manipulate cell development (e.g., directed differentiation of ipsc).