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암 연구
0 조회수 • 3:45 분 • April 30th, 2023
배뇨근 평활근(DSM) 세포는 방광의 주요 기능 단위를 구성합니다. 이 세포는 방광에 소변 저장을 촉진하기 위해 이완되고 소변을 방출하기 위해 수축합니다.
DSM 세포를 분리하려면 먼저 수확한 인간 방광 표본을 채취하십시오. 검체를 세척하여 혈액과 부스러기의 흔적을 제거합니다. 그런 다음 점막 표면이 위를 향하도록 조직을 고정합니다. 지방, 혈관, 점막층을 절제하여 밑에 있는 배뇨근층을 노출시킵니다. 그런 다음 점막이 없는 조직을 작은 조각으로 자릅니다.
파파인이 함유된 소화 칵테일로 조직 조각을 처리하고 배양합니다. 단백질 분해 효소인 파파인은 세포를 함께 유지하는 세포외 기질의 단백질 소화를 촉진하고 기질의 세포가 느슨해지도록 시작합니다. 이제 파파인 함유 상청액을 제거합니다.
조직 조각에 콜라게나제 효소 현탁액을 첨가하고 생리학적 온도에서 배양합니다. 콜라게나제는 세포외 기질을 분해하고 DSM 세포의 해리를 촉진합니다. 생리학적 온도에서 배양하면 DSM 세포 무결성을 보존하는 데 도움이 됩니다. 콜라게나제 함유 상청액을 버립니다.
얼음처럼 차가운 완충액으로 조직 조각을 세척하여 잔류 효소를 제거합니다. 그런 다음 완충액에 재현탁합니다. 효소 처리된 조직 단편을 부드럽게 분쇄하여 방출되지 않은 세포의 완전한 해리를 보장하고 DSM 세포의 단일 세포 현탁액을 얻습니다. DSM 셀은 추가 사용할 때까지 저온에 보관하십시오.
전체 두께의 방광 검체를 검사하는 것으로 시작합니다. 점막이 위쪽을 향하고 장막이 아래를 향하도록 표본을 얼음처럼 차가운 DS로 채워진 실리콘 거울상 이성질체로 코팅된 150mm 원형 접시에 고정하고 날카로운 해부로 모든 점막을 조심스럽게 제거합니다.
점막이 없는 배뇨근 평활근 또는 DSM 조각을 여러 개 잘라냅니다. 3-6개의 DSM 조각을 파파인과 디티오트레이톨 또는 DS-P를 함유한 예열된 DS 1-2밀리리터가 담긴 튜브에 넣습니다. 섭씨 37도에서 30-45분 동안 배양하고 10-15분마다 튜브를 흔들어 주십시오.
배양 후 튜브에서 DS-P를 제거하고 얼음처럼 차가운 DS로 DSM 조각을 잠시 세척합니다. DSM 조각이 있는 DS를 새 튜브로 옮기고 DS를 제거하고 DSM 조각은 튜브 바닥에 남겨둡니다. 콜라게나제 유형 II 또는 DS-C를 함유하는 DS 1-2밀리리터를 튜브에 넣고 가끔 흔들면서 섭씨 37도에서 배양합니다.
DS-C를 버리고 효소 처리된 DSM 조각을 얼음처럼 차가운 DS로 5-10회 세척합니다. 마지막 세척 후 DS를 튜브 내부에 두고 불로 연마한 파스퇴르 피펫으로 조각을 부드럽게 분쇄하여 단일 DSM 세포를 방출합니다.