쥐 신장 세포 분리: 신장 세뇨관 상피 세포의 1차 배양을 분리하고 생성하는 기술

0 조회수3:21 • April 30th, 2023

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신세뇨관 상피 세포 또는 TEC를 분리하려면 페트리 접시에서 새로 분리된 마우스 신장을 채취하는 것부터 시작합니다. 신장을 둘러싼 얇은 바깥층인 신피막을 벗겨내고 수질 또는 신장의 가장 안쪽 부분을 제거하고 세뇨관과 세뇨관 상피 세포가 포함된 피질을 남깁니다.

남은 신장 부분을 작은 조각으로 다진 다음 효소 콜라게나제가 포함된 따뜻한 소화 완충액에서 배양합니다. 콜라게나제는 신장 조직을 함께 유지하는 콜라겐 단백질을 분해하여 세뇨관과 신장 세포를 현탁액으로 방출합니다.

현탁액을 여과하여 소화되지 않은 신장 조직을 제거합니다. 다음으로, 미리 냉각된 배양 배지를 여과액에 추가합니다. 온도가 낮을수록 콜라게나제가 중화되고 추가 조직 소화가 중단됩니다. 여과액을 저속으로 원심분리하여 밀도가 높은 세뇨관과 관형 세포가 침전되고 다른 세포 유형과 불순물이 부유된 상태로 유지되도록 합니다.

이 원치 않는 상청액 분획을 제거하고 배양 배지를 첨가하여 펠릿을 재현탁합니다. 콜라겐 코팅 배양 접시에 현탁액을 시드하고 배양합니다. 자유 관형 세포는 콜라겐에 단단히 부착되는 반면 세뇨관은 부유 상태를 유지합니다. 부착되지 않은 세뇨관을 제거하고 세뇨관 상피 세포의 1차 배양을 얻기 위한 계대 배양

.

채취한 신장을 처리하려면 먼저 신장 캡슐과 수질을 제거합니다. 그런 다음 양쪽 신장을 작은 조각으로 다진 다음 섭씨 37도 오븐에서 소화 완충액 10밀리리터에 넣고 5분 동안 부드럽게 회전시켜 배양합니다.

소화 후 완충액을 70미크론 필터에 통과시켜 소화되지 않은 조직을 제거합니다. 소화된 조직을 채취한 후 배양액 10밀리리터를 첨가하여 소화를 중단합니다. 다음으로, 여과된 조직 현탁액을 50 x g으로 5분 동안 원심분리하여 관형 세포를 펠릿화합니다. 그런 다음 상청액을 새 튜브로 옮기고 5밀리리터의 배양 배지를 추가한 다음 원심분리를 반복하여 남은 세뇨관 세포를 수집합니다.

이제 첫 번째 펠릿을 20밀리리터의 배양 배지에 재현탁하고 50 x g에서 5분 동안 원심분리하여 수집된 세포를 추가로 정제합니다. 상청액을 폐기하십시오. 그런 다음 두 펠릿을 10밀리리터의 배양 배지에 재현탁합니다. 다음으로, 트리판 블루 염색을 사용하여 살아있는 세포의 수를 계산합니다. 그런 다음 최대 1,000만 개의 세포를 60mm 콜라겐 코팅 접시에 시드하고 관형 세포가 밤새 부착되도록 합니다.

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마지막 업데이트: 1 8월 2026