유체역학적 신장 골반 주사: 쥐 모델의 신장 세포에 DNA를 직접 전달하는 기술

플라스미드 DNA를 마우스 신장 세포에 직접 전달하려면 마취된 마우스를 측면 위치에 놓는 것부터 시작합니다. 측면에서 등쪽 털을 제거하여 마우스를 준비합니다. 흉곽 아래 왼쪽 옆구리에서 적절한 절개 부위를 찾습니다.

피부와 밑에 있는 근육층에 작은 슬릿을 만듭니다. 그런 다음 복강에 부드러운 압력을 가하여 절개 부위를 통해 신장을 노출시킵니다. 신우를 시각화하기 위해 오버레이된 신주위 지방 조직을 부분적으로 제거합니다.

이제 유체역학적 전달 완충액에 플라스미드 DNA가 들어 있는 주사기를 가져갑니다. 신장에 있는 요관의 삼각형의 확장된 부분인 신우에 바늘을 직접 삽입합니다. DNA가 혈액을 걸러내는 신장의 기능적 부분인 신장 실질에 직접 도달하도록 플라스미드 용액을 빠르게 주입합니다.

신우를 통해 많은 양의 체액이 빠르게 전달되면 높은 압력이 형성되어 신장 실질 세포의 원형질막에 일시적인 기공이 생성됩니다. 이것은 플라스미드가 세포에 들어가는 것을 용이하게 합니다. 결국 이 기공은 닫혀 세포 내에 플라스미드를 가둡니다.

마지막으로 바늘을 집어넣고 신장을 복강으로 되돌립니다. 절개 부위의 피부와 근육층을 봉합합니다.

멸균 수술용 장갑을 착용하고 절개 부위부터 시작하여 새로운 클로르헥시딘/알코올 면봉으로 동물을 원을 그리며 세 번 면봉으로 닦습니다. 이제 절개 부위를 찾으세요. 핀셋으로 피부를 꼬집고 가위를 사용하여 흉곽 아래 척추에서 약 1cm 떨어진 피부층을 자릅니다. 근육층 아래에 중앙 컷을 하나 더 만듭니다. 신장을 찾아 만지지 않고 손가락으로 복부에 꾸준히 부드러운 압력을 가하여 복강에서 부드럽게 노출시킵니다.

신장을 노출시키는 것은 때때로 어렵습니다. 비장이 손상되지 않도록 복부와 척추에 부드러운 압력을 가하십시오. 신장 이외의 장기가 나오면 필요한 경우 닫힌 겸자를 사용하여 부드럽게 체강으로 되돌립니다.

그런 다음 작은 흰색 점으로 볼 수 있는 신우를 시각화할 수 있을 만큼 신장을 주변 지방과 부드럽게 분리합니다. 신우를 시각화한 후 닫힌 겸자를 사용하여 신장의 오른쪽을 아래로 눌러 신우가 시야에 유지되도록 합니다. 그런 다음 장전된 인슐린 주사기를 작업 표면과 평행하게 잡고 오른손으로 잡고 바늘을 신우에 조심스럽게 삽입합니다.

바늘을 삽입한 후 3초 이내에 용액을 빠르게 주입합니다. 용액의 역류를 방지하기 위해 바늘을 약 10초 동안 제자리에 두십시오. 그런 다음 바늘을 천천히 조심스럽게 제거하고 닫힌 겸자를 사용하여 절개 부위를 부드럽게 늘려 장기를 복강으로 되돌립니다. 이제 5-0 흡수성 봉합사로 근육층을 봉합하고 2-4개의 독립적인 매듭을 놓습니다. 마찬가지로 5-0 또는 6-0 비흡수성 나일론 봉합사로 피부층을 봉합하고 2-4개의 독립적인 매듭을 놓습니다.