신세포암 모델 생성: 암세포의 신장 내 이식에 의한 정소성 RCC 쥐 모델을 개발하기 위한 프로토콜

0 조회수3:49 • April 30th, 2023

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기증자 마우스에서 면역 저하 수혜자 마우스의 신장에 신장 세포 암종(RCC) 세포를 이식하면 동소 RCC 모델이 개발됩니다.

동소 RCC 모델을 개발하려면 마취된 면역결핍 마우스를 해부 보드에 엎드린 자세로 놓는 것부터 시작하십시오. 이제 메스를 사용하여 쥐의 왼쪽 옆구리를 외과적 절개하여 밑에 있는 복막을 손상시키지 않습니다.

바닥에서 부드러운 압력을 가하여 마우스를 촉진합니다. 이 단계는 반투명 복막을 통해 신장을 시각화하는 데 도움이 됩니다. 다음으로, 적절한 배지에 RCC 세포 현탁액이 들어 있는 주사기를 취합니다. 바늘을 사용하여 복막을 손상시키지 않고 세포 현탁액을 신장에 주입합니다.

바늘을 집어넣고 조직 접착제를 사용하여 절개 부위를 밀봉합니다. 마우스가 원하는 간격으로 종양 성장을 회복하고 모니터링하도록 합니다. 처음에는 주사된 신장암 세포가 신장에 이식됩니다. 그런 다음 이 세포는 증식하여 종양을 형성합니다.

그 후, 몇 개의 세포가 원발성 종양에서 분리되어 복막강 내에서 퍼질 수 있습니다. 이러한 이동하는 종양 세포는 폐 조직을 침범하여 전이되어 이차 종양을 형성할 수 있습니다.

Renca 종양 세포를 준비하기 위해서는 먼저 PBS로 헹군 후 HBSS에 0.25% 트립신을 부착한 세포 배양물을 부착합니다. 완전한 RPMI 배지로 5분 후에 반응을 중화합니다. 원심분리를 위해 세포를 원추형 튜브로 옮기고 펠릿을 신선한 HBSS에 재현탁합니다.

계수 후 HBSS에서 밀리리터당 10에서 6번째 세포 농도의 2배로 부피를 조정하고 세포를 18게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기에 끌어당깁니다. 그런 다음 가열 패드 위에 멸균 수술용 드레이프를 놓고 발가락을 꼬집어 적절한 진정 수준을 확인합니다. 쥐의 왼쪽 옆구리에서 털을 제거하고 수의사 연고를 눈에 바릅니다.

그런 다음 5% 포비돈-요오드 방부제로 이식 부위를 면봉으로 닦고 멸균 메스를 사용하여 복막을 관통하지 않도록 주의하면서 왼쪽 옆구리에 1-1.5cm 길이의 단일 절개를 합니다. 가위를 사용하여 복막에서 진피를 분리하고 멸균 면 거즈로 절개 부위를 두드려 혈액을 제거합니다. 그런 다음 왼손으로 머리를 잡고 오른손으로 옆구리를 지탱하여 복막을 통해 비장을 찾습니다.

오른손의 한 손가락을 사용하여 아래에서 마우스를 촉진합니다. 신장이 보여야 합니다. 복막과 신장에 장력을 주기 위해 동물을 단단히 잡고 조수가 온전한 복막을 통해 신장 중앙으로 0.1밀리리터의 렌카 세포를 천천히 전달하도록 합니다. 세포의 역류를 줄이기 위해 바늘을 5-10초 동안 제자리에 고정합니다. 그런 다음 시아노아크릴레이트 조직 접착제의 얇은 층으로 절개 부위를 닫습니다.

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