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암 연구
0 조회수 • 2:57 분 • April 30th, 2023
성체 제브라피쉬는 결합 조직을 통해 등쪽 체벽에 부착된 하나의 납작한 신장을 가지고 있습니다. 머리, 몸통, 꼬리의 세 가지 주요 영역으로 구성됩니다. 신장의 기능 단위인 네프론은 고도로 분기되어 있으며 두 개의 주요 집합관으로 배출됩니다.
신장을 분리하려면 먼저 안락사된 성체 제브라피쉬의 복부가 위를 향하도록 준비합니다. 개골 뒤(아가미를 덮고 있는 뼈 피판)를 절개하여 머리를 제거합니다. 그런 다음 머리에서 꼬리 지느러미 또는 꼬리 지느러미 기저부까지 또 다른 절개를 하여 내부 장기를 노출시키고 제거합니다.
이제 신장을 시각화하기 위해 체벽을 핀으로 엽니다. 밑에 있는 결합 조직을 해부하여 등벽에서 신장을 분리합니다. 장기를 적절한 완충액이 들어 있는 바이알에 옮기고 철저히 세척하여 잔해물을 제거합니다. 완충액은 생리학적 조건을 제공하는 데 도움이 됩니다. 세척 후 완충액으로 수분을 공급한 신장을 유리 슬라이드 위에 놓습니다.
신장이 완전히 평평한지 확인하고 필요한 경우 결합 조직을 절단하십시오. 이 단계는 이미징 중에 쉽게 시각화하는 데 도움이 됩니다. 마지막으로 모서리에 모델링 점토 조각이 부착된 커버슬립을 사용하여 장기 준비를 고정합니다. 점토는 조직 변형을 방지하는 데 도움이 됩니다. 이제 평평하게 장착된 조직은 현미경 분석을 위한 준비가 되었습니다.
시작하려면 마취된 물고기에서 여분의 용액을 디캔팅하고 티슈나 종이 타월 위에 놓습니다. 머리와 내부 장기를 제거한 후 초미세 해부 바늘을 사용하여 체벽을 고정합니다. 동물의 등벽에 부착된 신장 기관을 찾으십시오.
미세한 집게를 사용하여 등벽에서 신장을 분리합니다. 신장을 1x PBS가 들어 있는 5밀리리터 유리 바이알에 부드럽게 넣고 각각 5분 동안 세 번 세척합니다. 이송 피펫으로 신장을 제거하고 1x PBS를 1-2방울로 깨끗한 유리 슬라이드에 놓습니다.
미세한 집게를 사용하여 슬라이드에서 신장을 평평하게 만들고 조직이 말리거나 전복되지 않았는지 확인합니다. 텅스텐 와이어 도구를 사용하여 결합 조직에 작은 절개를 하여 신장의 평평한 위치를 용이하게 할 수 있습니다.
다음으로, 18 x 18mm 유리 커버슬립의 각 모서리에 작은 모델링 점토 조각을 놓습니다. 기포가 갇히는 것을 최소화하기 위해 약간의 각도를 유지하면서 커버슬립을 신장에 천천히 놓습니다. 필요한 경우 커버슬립과 슬라이드 사이의 공간을 채우기 위해 1x PBS를 추가로 추가합니다.