Fluid Aspiration from Mouse Glomeruli: A Method to Aspirate from Mouse Glomerular Fluid Using Two-Photon Mediated Micropuncture(생쥐 사구체의 유체 흡인: 이광자 매개 미세천자를 사용하여 마우스의 사구체 유체를 흡인하는 방법)

신장에서 사구체(Bowman's capsusu)에 둘러싸인 작은 혈관 다발은 혈액 여과를 시작하고 노폐액을 주변 Bowman의 공간으로 배출합니다. 사구체액 내용물을 조사하면 신장 생리학을 이해하는 데 도움이 됩니다.

사구체액을 흡인하려면 신장을 외과적으로 외부화한 마취된 마우스를 준비합니다. 이제 형광-덱스트란 염료를 마우스의 눈 궤도 뒤의 혈관에 주입합니다. 형광-덱스트란 분자는 혈류를 통해 이동하여 신장에 도달합니다.

덱스트란의 고분자량으로 인해 형광 염료는 사구체 내에 유지되어 녹색을 부여합니다. 깊숙이 자리 잡은 구조를 시각화할 수 있는 2광자 현미경에서 사구체액에 대한 적절한 접근을 얻기 위해 적합한 사구체를 찾습니다.

다음으로, 빨간색 형광 나노입자로 코팅된 마이크로피펫 팁을 신장의 측면 축에 맞춥니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 피펫 팁을 전진시켜 신장을 관통합니다. 팁이 목표 사구체에 도달하면 원하는 흡인 속도를 설정하여 Bowman의 공간에서 사구체액을 흡인합니다.

빨간색 피펫 팁 내부에 녹색 형광이 없으면 출혈이 없음을 나타내며 성공적인 사구체액 흡인을 확인합니다. 그런 다음 피펫을 집어넣고 추가 분석을 위해 유체를 적절한 완충액에 보관하십시오.

발가락 꼬집기에 대한 반응 부족을 확인한 후 눈에 연고를 바르고 테이프를 사용하여 20-25g의 성체 마우스의 사지를 고정합니다. 제모 크림을 사용하여 동물의 왼쪽에 있는 털을 모두 제거하고 비장을 사용하여 비장의 등쪽과 꼬리 쪽의 피부를 통해 왼쪽 신장을 찾습니다.

피부에 0.5cm 절개를 한 다음 복막에 신장이 밀려날 수 있을 만큼 큰 작은 절개를 합니다. 부드러운 압력으로 신장을 압출하고 조직 주위에 폴리실록산 신장 안정제 형태를 놓습니다. 신장의 가장 측면 표면이 안정제를 넘어 약 1mm 확장되도록 신장을 스페이서로 정렬하고 시아노아크릴레이트 접착제로 신장을 형태에 고정합니다. 헤드 플레이트를 스태빌라이저 형태에 붙이고 헤드 플레이트를 베이스 플레이트의 장착 바에 장착합니다.

다음으로, 폴리실록산 지지체의 웰을 1% 아가로스 용액으로 채우고 아가로스가 단단해질 때까지 양식 위에 10mm 커버슬립을 잡습니다. 커버슬립을 접착제로 헤드 플레이트에 밀봉하고 치과용 시멘트로 커버슬립 주위에 링을 만듭니다. 그런 다음 100-150마이크로리터의 FITC-덱스트란을 후궤도로 주입하고 마우스와 고정판을 2광자 현미경 스테이지로 빠르게 이동합니다.

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