닭 CAM에 대한 신장 유기형 배양: 신장 혈관 구조의 형성을 유도하기 위해 닭 CAM에 쥐 신장 이식 기술

닭 융모막(CAM)은 달걀 껍질 아래에 존재하는 고도로 혈관화되고 자연적으로 면역결핍된 층입니다. CAM은 기증자 유기체에서 다른 종의 수혜자로 조직을 이종 이식하는 이종 이식을 위한 이상적인 모델 역할을 합니다.

닭 CAM에서 신장 기관형 배양을 수행하려면 바닥에 투과성 막이 있는 미니 저장소를 가져가는 것부터 시작하십시오. 미니 저장소를 뒤집어 페트리 접시에 있는 미디어 한 방울 위에 놓습니다. 이렇게 하면 멤브레인이 매체와 직접 접촉할 수 있습니다. 쥐 신장 외식편을 미리 젖은 막으로 옮깁니다. 신장 주변의 과도한 매체를 흡인합니다.

신장 외식편이 막에 부착되는 것을 용이하게 하기 위해 배양합니다. 다음으로, 완전히 발달된 CAM을 보이는 배아 닭에서 난소 배양을 취합니다. 배아 주변의 눈에 띄는 혈관을 찾습니다. 신장 외식편이 부착된 저장소를 가져와 막이 신장 외식편을 CAM 조직에 대고 누르도록 CAM 위

로 뒤집습니다.

신장 외식편의 성장을 지원하고 수축을 방지하기 위해 저장소에 배지를 보충하십시오. 장기간 재배하십시오. CAM 혈관은 이식된 신장에 침윤하여 신장 외식편 내에서 혈관 형성을 유도하여 CAM 조직에서 기능적 신장의 재현을 자극합니다.

실험에 따라 6웰 또는 12웰 플레이트용으로 설계된 트랜스웰 세포 배양 인서트를 사용하십시오. Dremel 도구를 사용하여 인서트의 크기를 줄여 투과성 멤브레인이 부착된 2mm 높이의 플라스틱 링을 만듭니다.

메스나 날카로운 칼로 부스러기에서 반지의 가장자리를 닦으십시오. 미니 저장소를 70% 에탄올로 최소 1시간 동안 소독합니다. 그런 다음 미니 저장소를 오토클레이브에서 증류수로 세척하고 층류 후드에서 건조시킵니다. PBS와 배양 배지로 미니 저장소를 헹굽니다.

멤브레인이 위를 향하도록 배양 배지 한 방울 위에 페트리 접시 위에 저장소를 놓습니다. 해부된 생체 외 배아 신장 또는 신장 오가노이드를 막에 배열합니다. 샘플 주위에 많은 액체를 남기지 말고 세포 배양 인큐베이터에서 2-24시간 동안 부착시키십시오.

이종 이식은 생후 8일 된 생체 외 배아 닭의 융모막 수련막에 수행됩니다. 멤브레인이 이식편을 덮도록 미니 저장소를 옮깁니다. 배아를 덮지 않도록 CAM의 주변에 놓습니다.

그런 다음 미니 저장소에 배양 배지를 추가합니다. 닭 CAM에서 최대 9일 동안 샘플을 배양합니다. 매일 미니 저장소의 배양 배지를 교체하십시오. 샘플의 혈관 화는 이식 후 이미