외과적 수조 마그나 주사: 쥐 모델의 중추 신경계에 종양 세포를 직접 투여하는 방법

쥐의 뇌는 가장 바깥쪽 경막막, 중간 지주막 및 가장 안쪽 연막의 세 개의 수막 층으로 둘러싸여 있습니다.

뇌의 후방 영역에서 지주막과 연막은 대수조라고 하는 뇌척수 또는 CSF로 채워진 지주막하 공간에 의해 개입됩니다.

종양 세포의 수흉관내 주사를 수행하려면 마취된 마우스 모델을 취하는 것부터 시작합니다. 머리의 복부 표면에서 머리카락을 제거하여 마우스를 준비합니다.

이제 마우스를 엎드린 자세로 놓고 머리를 정위 고정 프레임에 부착합니다. 마우스의 코를 약간 아래쪽으로 향하게 하여 척추가 수조로 수평을 맞

위를 사용하여 귀 높이에서 뇌의 뒤쪽 끝에 작은 정중선 절개를 합니다.

표면 근육층을 조심스럽게 옆으로 당깁니다. 수조 마그나는 투명한 경막막으로 덮인 역삼각형으로 시각화할 수 있습니다.

다음으로 순환 종양 세포 현탁액이 들어 있는 주사기를 가져갑니다.

주변 근육 조직을 수축시킨 상태에서 주사기를 경막 아래에 삽입하여 지막을 관통합니다. 이 단계를 통해 종양 세포를 수조에 존재하는 CSF에 직접 주입할 수 있습니다.

마지막으로 상처 클립을 부착하여 절개 부위를 봉합하고 마우스가 회복되도록 합니다.

1kg당 1mg의 서방형 부프레노르핀을 마우스에 피하 주사합니다. 마우스를 마취한 후 수술을 준비합니다. 털이 절개 부위를 오염시키지 않도록 충분한 경계 영역으로 수술 부위를 클립

머리 표면 전체의 털을 면도하고 멸균 기술을 사용하여 피부를 준비합니다. 그런 다음 살균 피부 방부제로 부위를 적셔 부위 중앙에서 주변으로 작업하고 건조시킵니다.

척추가 수조와 수평을 유지하도록 몸의 위치를 지정합니다. 꼬리에 약간의 견인력을 가하면서 꼬리 바닥에 테이프를 붙여 고정합니다.

멸균 드레이프 또는 멸균 접착식 플라스틱 드레이프 재료를 적용하여 수술 부위를 오염으로부터 보호합니다. 목을 완전히 펴고 외과용 가위 끝을 아래쪽으로 움직여 귓바퀴 사이에서 시작하여 후두골을 가로질러 약간의 압력을 가합니다.

만져진 오목한 부분 약간 위에 3-5mm의 작은 정중선 절개를 합니다. 5마이크로리터의 세포 현탁액을 30G Hamilton 주사기에 끌어당깁니다. 끝이 1-2mm 길이의 뭉툭한 집게를 사용하여 수조 마그나를 부드럽게 누릅니다.

팁을 닫은 위치에 넣고 경막에 아래쪽 압력을 가하면서 엽니다. 경막이 쉽게 식별되고 노출된 부위에 관련 혈관이 보일 때까지 무딘 해부를 반복합니다.

집게를 잡고 열어 주변 근육 조직을 수축시킵니다. 경막 아래에 30G 비코어링 바늘을 삽입하여 베벨을 시각화하고 바늘이 베벨 자체 바로 너머에만 삽입되도록 합니다.

사기 플런저를 천천히 배치하고 경막 바로 아래에 세포를 전달합니다. 주사 부위에 누출이 발견되면 끝이 면으로 된 어플리케이터로 부드럽게 압력을 가하십시오. 상처 클립이나 피부 접착제의 마이크로 드롭을 도포하여 피부를 닫습니다.

첫 주 동안 수술 후 매일 마우스를 모니터링합니다. 쥐가 통증이나 괴로움을 느끼는 것처럼 보이면 수의사의 상담 및 지시에 따라 최대 5일 동안 12-24시간에 한 번씩 카프로펜 킬로그램당 10mg의 피하 주사로 치료하십시오.