루시페라제 태그 신경교종 줄기세포 모델: 체외 치료 연구를 위해 루시페라제 태그 신경교종 줄기세포를 준비하기 위한 렌티바이러스 매개 방법

신경아교종 줄기 세포 또는 GSC는 뇌에 있는 신경교세포의 암인 신경아교종의 하위 집단입니다.

이러한 GSC를 루시페라아제와 같은 생물발광 효소로 태그하면 약물 스크리닝을 위한 고처리량 이미징 분석을 확립하는 데 도움이 됩니다.

루시페라아제 태그가 붙은 GSC를 준비하려면 적절한 성장 배지에서 GSC를 배양하는 것으로 시작합니다.

배양액을 원심분리하여 세포 펠릿을 얻고 상청액을 제거합니다.

펠릿에 적절한 소화 효소를 첨가하십시오. 이 효소는 세포 클러스터를 해리하고 결합 조직의 흔적을 분해하여 단일 세포 현탁액을 얻습니다.

이제 단일 세포 현탁액을 원심분리하고 상층액을 제거합니다. 펠릿을 신선한 배지에 재현탁합니다.

다음으로, 배양 플레이트에 원하는 농도의 세포를 시드합니다.

배양액을 배양하고 세포가 배양 플레이트에 부착되도록 합니다.

그 후, 루시페라아제 강화 녹색 형광 단백질 또는 EGFP에 대한 바이러스 함유 유전자 구조물의 원하는 역가를 첨가하고 배양합니다.

바이러스는 GSC의 표면 수용체와 상호 작용하여 루시페라아제-EGFP를 함유한 바이러스 RNA의 방출을 유발합니다. 세포 효소는 RNA의 이중 가닥 DNA로의 역전사를 촉매하여 GSC의 게놈에 통합합니다.

형광 현미경으로 시각화하면 루시페라아제 발현 세포는 EGFP에서 방출되는 형광으로 인해 녹색으로 나타납니다.

배양 배지에서 신경아교종 줄기 세포 또는 GSC를 수집하고 실온에서 3분 동안 70 x g으로 원심분리하는 것으로 시작합니다. 상청액을 제거한 후 섭씨 37도에서 4분 동안 accutase로 세포를 소화합니다.

200마이크로리터 팁을 사용하여 세포를 반복적으로 피펫팅하여 세포 펠릿을 해리하고 재현탁합니다. 1밀리리터의 배양 배지에 200,000개의 세포 밀도로 GSC를 12웰 배양 플레이트의 각 웰에 첨가하고 밤새 배양합니다.

다음날, 30마이크로리터의 루시페라아제-EGFP 바이러스 상청액을 플레이트의 각 웰에 첨가합니다. 세포를 섭씨 25도에서 2시간 동안 1,000 x g으로 원심분리하고 밤새 배양합니다.

다음날, GSC를 수집하고, 원심분리하고, 상청액을 제거하고, 신선한 배지에 재현탁하고, 재도금하여 웰의 배지를 교체합니다. 세포를 48시간 더 배양합니다.

형광현미경으로 플레이트를 관찰하고 GFP 양성 세포의 출현을 확인합니다.

• Glioma Stem Cells (GSCs) - Cancerous subpopulation of glial cells in the brain.
• Luciferase Cells - Cells tagged with the bioluminescent enzyme, luciferase.
• Glial Cell Tumor (Glioma) - A type of brain cancer originating from glial cells.
• Luciferase Lentivirus - Virus used to tag cells with luciferase for tracking purposes.
• Luciferase Structure - The specific formation of luciferase enzyme.

• Introduce Glioma Stem Cells and how they relate to brain cancer (e.g., glioma).
• Outline the role of luciferase in cell tracking and how it is introduced (e.g., luciferase lentivirus).
• Explain how luciferase cells are prepared for scientific experiments.
• Connect to the process of tagging GSCs with luciferase and its implications in cancer research.

• [Question 1] What are luciferase cells and how are they used in brain cancer research?
• [Question 2] How is the luciferase enzyme introduced into GSCs?
• [Question 3] How is the process of tagging GSCs with luciferase conducted?

• Describe how luciferase tagging aids in drug screening for brain cancer (e.g., glioma).
• Identify the potential impact on the medical industry, particularly in cancer research (e.g., glioma stem cells).
• Highlight the importance of this research to the broader scientific and medical communities.
• Link luciferase cell tagging to potential advancements in cancer treatment solutions.