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암 연구
0 조회수 • 3:17 분 • April 30th, 2023
세포 생물발광은 항암제의 대규모 스크리닝을 위한 매우 민감하고 신속한 접근 방식입니다.
이 기술은 빛을 생성하는 화학 반응을 촉매하여 숙주 세포를 어둠 속에서 빛나게 하는 효소인 루시페라아제를 발현하는 종양 세포를 사용합니다. 방출된 발광의 강도는 살아있는 세포 밀도에 정비례합니다.
시작하려면 세포외 기질 또는 ECM으로 코팅된 광학적으로 투명한 배양 플레이트에 루시페라아제 발현 세포를 시드하고 배양합니다.
배양하는 동안 ECM은 배양물에 세포가 부착되는 것을 촉진합니다.
다음으로, 약물 조합의 농축 스톡을 취하고 다양한 양의 배양 배지를 추가하여 약물 혼합물의 연속 희석을 준비합니다.
이제 부착된 세포에서 배양 배지를 제거합니다. 약물 조합의 다른 희석액을 추가하고 배양합니다.
배양하는 동안 약물 조합은 세포 표적에 시너지 효과를 발휘합니다.
이제 약물 함유 배지를 제거하고 루시페린을 함유한 신선한 배지를 추가합니다.
루시페린은 막을 가로질러 확산되어 세포로 들어갑니다. 세포에 의해 발현되는 루시페라아제는 세포 ATP를 사용하여 루시페린을 산화시키고 빛 신호를 방출합니다.
이미징 시스템에서 세포 생물 발광을 정량화합니다.
약물 농도가 증가함에 따라 발광이 감소하면 세포 생존력이 감소했음을 나타냅니다. 이는 표적 세포에 대한 약물의 항증식 효과와 관련이 있습니다.
96웰 광학 바닥 플레이트를 마트리겔과 같은 세포외 매트릭스 혼합물로 코팅하고 섭씨 37도에서 1시간 동안 배양합니다. 여분의 혼합물을 제거하고 PBS로 플레이트를 한 번 부드럽게 헹굽니다.
그런 다음 XG387-Luc 세포를 100마이크로리터의 배양 배지에 1,000개의 밀도로 코팅된 플레이트의 각 웰에 시드하고 밤새 배양합니다. 다음날 현미경으로 세포를 관찰하여 플레이트에 부착되었는지 확인합니다.
다음으로, 배양 배지에 표적 제제의 200마이크로몰 테모졸로마이드 용액과 2마이크로몰 용액을 준비합니다. 복합 약물 스크리닝의 경우, 블랭크 배지를 제거하고 200마이크로몰 테모졸로마이드 또는 2마이크로몰 표적 제제 또는 이 둘의 조합을 포함하는 배지를 각 웰에 추가하여 처리당 3회의 기술 복제를 수행합니다.
플레이트를 섭씨 37도와 이산화탄소 5%에서 3일 동안 배양합니다. IVIS 스펙트럼 이미징 시스템을 사용하여 플레이트의 세포 생물 발광 이미지를 촬영합니다. 내장된 소프트웨어를 사용하여 관심 영역의 여러 원형 영역을 만들고 세포 생물 발광을 정량화합니다.