0 조회수 • 2:37 분 • April 30th, 2023
급속 냉동으로 쥐 뇌 샘플을 냉동 보존하려면 먼저 전도성이 높은 액체인 이소펜탄 용액으로 채워진 비커를 액체 질소가 들어 있는 병에 담그십시오.
용액이 점성이 될 때까지 이소펜탄을 얼립니다.
한편, 자당 용액에 접두사가 붙은 전체 마우스 뇌 샘플을 채취합니다. 이 치료는 후속 단계에서 뇌 조직 변형을 방지합니다.
자당 용액에서 뇌 샘플을 제거하고 말려 자당의 흔적을 제거합니다.
다음으로, 뇌를 원하는 방향으로 포매 배지 층이 포함된 깊은 냉동몰드에 배치합니다.
전체 장기가 덮이도록 더 많은 포매 매체로 냉동몰드의 뇌를 오버레이합니다.
그런 다음 뇌가 내장된 냉동몰드를 미리 냉각된 이소펜탄 수조에 담급니다. 뇌 조직을 초저온으로 빠르게 냉각하면 왜곡 없이 뇌 구조가
유지됩니다.이제 매립 배지가 응고되어 뇌 주위에 젤라틴 층을 형성하여 제자리에 고정할 때까지 뇌 표본을 동결시킵니다.
얼면 이소펜탄 욕조에서 냉동 몰드를 제거하고 냉동 보존된 마우스 뇌를 호일 시트로 싸십시오.
추가 조직학적 분석을 위해 샘플을 섭씨 영하 80도에 보관하십시오.
냉동 보존을 준비하려면 병에 차가운 이소펜탄/2-메틸부탄을 채우고 액체 질소가 채워진 용기에 병을 넣습니다. 용매가 식는 동안 여과지에 뇌를 닦아내고 뇌를 라벨이 붙은 냉동몰드에 넣습니다.
약 5밀리리터의 최적 온도 절단 매체를 크라이오몰드 중앙에 조심스럽게 추가하고 브레인을 원하는 방향으로 금형에 넣습니다. 깨끗한 집게를 사용하여 냉동몰드를 냉각된 이소펜탄/2-메틸부탄에 30-40초 동안 빠르게 넣습니다.
절단 매체가 응고되면 크라이오몰드를 드라이아이스에 옮기고 크라이오몰드와 급속 냉동 뇌 조직을 알루미늄 호일로 싸서 섭씨 영하 80도에서 보관합니다.