Cryopreserved Tissue Section Fixation and Staining: 레이저 현저해부를 위해 동결된 뇌 조직 절편을 처리하는 절차

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암 연구

0 조회수 • 2:41 분 • April 30th, 2023

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후속 분리를 위해 이질적인 마우스 뇌종양 조직에서 특정 세포 집단을 구별하기 위해, 관심 있는 냉동 보존된 뇌종양 조직 절편을 운반하는 유리 슬라이드를 촬영하는 것부터 시작하십시오.

감소하는

농도의 에탄올에서 조직을 순차적으로 배양합니다. 에탄올은 조직에 침투한 포획 배지를 용해시켜 핵산의 완전성을 유지하면서 조직을 고정합니다.

또한 에탄올은 조직을 재수화하여 후속 단계에서 균일한 염색을 가능하게 합니다.

이제 Cresyl violet으로 조직을 처리하십시오. 염기성 염료인 크레실 바이올렛은 핵산과 같은 산성 세포 성분을 염색합니다.

그 후, 에오신 Y로 조직을 대조염색합니다. 산성 염료인 에오신 Y는 세포질 단백질과 같은 기본 세포 성분을 염색합니다.

이 차등 염색 단계는 세포질과 다른 세포 구조를 구별하는 데 도움이 되어 관심 있는 세포를 식별할 수 있습니다.

염색 후 조직을 증가시키는 농도의 에탄올에 담가 조직을 탈수하고 과도한 조직 왜곡을 방지합니다.

다음으로 자일렌으로 티슈를 씻습니다. 자일렌은 조직 절편에서 에탄올을 대체하고 제거합니다.

마지막으로, 조직 형태를 보존하기 위해 조직 절편에 적절한 장착 용액을 추가합니다.

처리된 조직 절편은 조직에서 특정 세포를 정밀하게 분리할 수 있는 프로세스인 레이저 미세 해부에 사용할 준비가 되었습니다.

슬라이드를 30초 순차적으로 내림차순 에탄올 침지에 담근 다음 0.5% 에오신 Y 용액에 20초 및 5초 동안 크리스탈 바이올렛 용액을 염색합니다.

에오신 Y 배양이 끝나면 여과지를 사용하여 슬라이드를 닦아내고 순차적 상승 에탄올 침지에서 슬라이드를 탈수합니다. 에탄올에 60초 동안 담근 후 자일렌 용기에 슬라이드를 3분 동안 헹굽니다.

다음으로, RNase가 없는 물로 준비된 마운팅 매체에 샘플을 마운트하기 전에 실온에서 10초 동안 슬라이드를 건조시킵니다. 10-20초 후 슬라이드를 현미경 현미해부 플랫폼으로 옮깁니다.

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