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암 연구
0 조회수 • 2:54 분 • April 30th, 2023
부착 세포가 포함된 멀티웰 플레이트를 가져가는 것으로 시작합니다.
티미딘의 방사성 버전인 삼중소화 티미딘을 함유한 배지로 이 세포를 처리하고 배양합니다.
배양하는 동안 활발하게 복제되는 세포는 방사성 티미딘을 통합합니다. 이 티미딘은 아데노신과 반대쪽 짝을 이루어 증식 세포에서 방사성 표지 DNA를 생성합니다.
웰에서 사용한 배지를 제거합니다. 용해 완충액을 첨가하여 세포를 용해하고 DNA를 현탁액으로 방출합니다.
마이크로플레이트의 웰 위에 수확기의 수집 튜브를 놓아 세포 수확기 어셈블리를 준비합니다.
우물에서 부유 DNA를 흡인할 수 있도록 흡입 압력을 가합니다. 이 DNA는 여과지에 침착되어 특정 반점을 형성합니다.
DNA 반점이 있는 여과지 채드를 잘라냅니다. 이 차드를 섬광 바이알에 개별적으로 옮깁니다.
여과지에 섬광 칵테일을 겹쳐 놓습니다. 바이알을 액체 섬광 계수기에 놓습니다.
카운터 내부에서 표지된 DNA는 방사성 붕괴에 의해 에너지를 방출합니다. 이 에너지는 섬광 칵테일의 구성 요소에 의해 흡수됩니다. 결국 칵테일 성분이 펄스를 전달하기 시작하고 이는 차례로 센서에 흡수됩니다.
검출된 방사능의 양에 따라 세포 분열의 정도가 결정됩니다.
24웰 플레이트의 삼중 웰에 100,000개의 세포를 플레이트합니다. 46시간 후, 삼중수화 티미딘을 배양 배지에 첨가하고 섭씨 37도에서 2시간 동안 배양합니다.
그런 다음 배지를 제거한 후 예열된 0.25% 트립신-EDTA 300마이크로리터를 넣고 섭씨 37도에서 20분 동안 배양하여 세포를 분해하고 DNA를 방출합니다. 그런 다음 세포 수확기를 켜고 펌프를 켭니다.
여과지를 세포 수확기에 넣습니다. 세포 수확기의 튜브를 빈 빈 트레이에 계속 수집하십시오. 그런 다음 사전 세척을 눌러 여과지를 적십니다. 수집 튜브를 샘플 웰에 넣고 시작합니다.
뜨거운 광원을 사용하여 여과지를 건조시키고 해당 바이알을 트레이에 배치합니다. 바이알에 종이 챕드를 펀칭한 다음 각 바이알에 2밀리리터의 액체 섬광 칵테일을 추가합니다.
기계를 작동하기 전에 바이알을 섬광 카운터에서 1시간 동안 배양하여 활성 DNA 합성을 반영하는 각 샘플의 분당 수를 얻습니다.