혈액-뇌종양 장벽 또는 BBTB 모델: 종양에 대한 치료제 전달을 평가하기 위한 혈액-뇌 장벽 또는 BBB 모델의 적응

혈액뇌장벽(BBB)은 혈액과 뇌 사이의 물질 수송을 조절하는 내피 세포와 성상세포와 같은 뇌세포의 선택적 장벽입니다.

BBB 모델을 개발하려면 멤브레인 인서트를 배양 플레이트 뚜껑에 뒤집습니다.

막 위에 성상세포를 종자합니다. 배양 플레이트를 인서트 위에 놓고 배양합니다.

이것은 막과 우물 표면 사이에 성상세포를 가둡니다.

플레이트를 되돌려 성상세포를 바닥으로 가져오고 웰에 적절한 배지를 추가합니다.

삽입물에 장벽 형성에 필요한 세포 간 접촉을 향상시키는 최적의 밀착 접합 단백질을 발현하는 내피 세포를 추가합니다.

내피 세포가 막에 부착될 수 있도록 배양합니다.

사용한 배지를 제거하고 인서트를 잘 함유된 다른 성장 인자가 없는 성상세포 배지로 옮깁니다.

그 후, 성장 인자가 없는 내피 세포 배지를 삽입물에 추가하고 배양합니다.

성장 인자가 없으면 세포 분열이 억제되어 세포 간 접촉이 보존되고 장벽 특성이 안정화됩니다.

내피 세포와 성상세포는 상호 작용하여 BBB와 같은 긴밀한 접합부가 있는 기저막을 형성합니다.

다음으로, 신경아교종 스페로이드를 새로운 배양 우물에 시드합니다.

BBB 모델을 이러한 스페로이드 위로 옮기고 배양하여 혈액-뇌종양 장벽 또는 BBTB 모델을 형성합니다.

BBTB 모델에 표적 분자를 추가하여 종양 부위로의 전달을 평가합니다.

멸균 세포 배양 후드 아래에서 배양된 성상세포를 멸균 PBS 5밀리리터로 조심스럽게 세척합니다. 진공 펌프를 사용하여 PBS를 부드럽게 버리고 세포 해리 시약 2밀리리터를 5분 동안 첨가하여 세포를 분리합니다.

그런 다음 멸균 완전 성상세포 세포 배양 배지 10밀리리터를 용기에 첨가하여 세포 해리 시약의 활성을 억제합니다. 멸균 혈청학적 피펫을 사용하여 분리된 세포를 혈관에서 멸균 15밀리리터 튜브로 옮깁니다.

실온에서 250 x g에서 3분 동안 원심분리합니다. 한편, 인서트를 설정합니다. 멸균 겸자를 사용하여 뇌면이 위로 향하도록 인서트를 멸균 6웰 플레이트의 뚜껑에 놓습니다.

원심분리가 완료되면 세포 현탁액에서 상청액을 조심스럽게 버리고 튜브 벽에 펠릿을 최대 5회 부드럽게 피펫팅하여 성상세포 펠릿을 ABM 플러스 1밀리리터에 재현탁합니다.

그런 다음 세포 수를 계산하고 세포 현탁액 밀도를 삽입물당 400마이크로리터의 ABM 플러스에서 150,000개의 세포로 조정합니다. 이 세포 현탁액을 인서트 멤브레인의 뇌 쪽 중앙에 놓고 멸균 피펫 팁으로 모세관 힘을 사