Blood-Brain Barrier 모방 투과성 분석: 추적자 분자에 대한 BBB 모방의 투과성을 평가하기 위한 체외 분석

내피 세포, 주위 세포 및 성상세포로 구성된 혈액-뇌 장벽(BBB)은 생물학적 분자의 유입 및 유출을 조절하고 뇌 항상성을 유지하는 데 도움을 줍니다.

시험관 내에서 BBB 모델의 투과성을 평가하려면 다공성 막 삽입물의 상부 또는 혈액 측에 부착된 내피 세포와 막의 기저 또는 뇌 쪽에 부착된 성상세포로 구성된 시험관 내 BBB 모델로 시작합니다.

세포외 기질을 가진 내피 세포는 성상세포와 접촉하여 BBB 모방체를 형성합니다.

최적의 형광 측정을 위해 혈액과 뇌 측에서 원하는 양의 배지를 검은색 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.

배양의 혈액 쪽에서 배지를 저분자량 형광 추적자 분자를 포함하는 배지로 교체합니다.

배양에서 내피-성상세포 세포 접촉은 세포 장벽을 강화하고 단단한 장벽을 안정화하여 배양의 뇌 쪽으로의 추적 분자의 확산을 제한합니다.

또한, 원하는 시점에서 혈액과 뇌 쪽에서 적절한 양의 배지를 수집합니다. 양쪽을 용지로 교체하여 용지 볼륨을 유지합니다.

마지막으로, 멀티웰 플레이트 리더를 사용하여 수집된 배지의 형광을 측정하여 BBB 모델의 투과성을 평가합니다.

뇌 측의 형광 강도가 낮다는 것은 세포 장벽의 투과성이 낮다는 것을 시사합니다.

먼저, BBTB 모방체의 혈액 및 뇌 측면 모두에서 100마이크로리터의 배지를 수집하고 후속 형광 측정을 위해 각각을 별도의 바닥이 평평한 검은색 96웰 플레이트로 옮깁니다.

다음으로, EBM 마이너스에서 플루오레세인 나트륨의 50마이크로몰 용액을 준비하고 웰당 2.5밀리리터를 준비해야 합니다. 용액을 섭씨 37도로 예열하고 삽입물의 혈액 쪽에서 배지를 이 플루오레세인 나트륨 용액이 포함된 배지로 교체합니다. 매체를 교체하는 즉시 타이머를 시작하십시오.

5분, 30분, 60분, 120분 동안 삽입물의 혈액 및 뇌 측면에서 100마이크로리터의 배지를 조심스럽게 수집합니다. 각 샘플을 적절한 검은색 96웰 플레이트의 개별 웰로 옮깁니다. 플레이트 리더를 사용하여 수집된 샘플의 형광을 정량화합니다.