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암 연구
0 조회수 • 4:48 분 • July 8th, 2025
죽어가는 세포는 세포 외부에서 무세포 또는 cfDNA 단편을 방출합니다. cfDNA 단편의 크기 분포를 분석하려면 소형 모세관 전기영동 시스템인 멀티웰 DNA 칩으로 시작하십시오. 칩의 각 웰에는 베이스에 수많은 미세유체 분리 채널이 포함되어 있습니다.
다당류 겔 매트릭스와 형광 염료 혼합물을 칩의 지정된 웰에 로드합니다. 빈 주사기가 장착된 프라이밍 어셈블리에 칩을 놓습니다. 프라이밍 어셈블리를 닫고 플런저를 아래로 눌러 아래쪽 압력을 생성합니다. 이것은 웰에서 각각의 분리 채널로 점성 겔의 진입을 용이하게 합니다.
어셈블리를 열고 나머지 웰을 cfDNA 현탁액과 알려진 크기 범위의 DNA 사다리로 채웁니다. 칩을 조각 분석기에 장착합니다. 강한 전압은 샘플 웰에서 젤 매트릭스가 미리 로드된 분리 채널로 cfDNA 현탁액이 유입되도록 유도하며, 여기서 DNA는 염료로 염색됩니다.
DNA가 음극에서 양극으로 이동함에 따라 작은 DNA 단편은 겔을 통해 더 빠르게 이동하는 반면 큰 단편은 더 느리게 이동합니다. 이는 DNA 단편의 크기 기반 분리로 이어집니다. 검출기는 단편에서 상대 형광을 감지하고 이를 DNA 사다리와 비교한 다음 cfDNA의 크기 분포를 나타내는 그래프인 전기페로그램을 생성합니다.
DNA 단편의 크기를 분석하려면 먼저 베이스 플레이트를 칩 프라이밍 스테이션에 고정하고 클립을 가장 낮은 위치에서 조정합니다. 새로운 고감도 DNA 칩을 칩 프라이밍 스테이션에 놓고 'G' 칩 웰 바닥에 9마이크로리터의 젤-염료 혼합물을 추가합니다. 플런저를 1밀리리터에 놓고 칩 프라이밍 스테이션을 닫습니다. 딸깍 소리가 날 때까지 걸쇠의 잠금 장치를 닫고 타이머를 60초로 설정한 다음 클립에 고정될 때까지 플런저를 누릅니다.
정확히 60초 후에 클립 해제 메커니즘을 사용하여 플런저를 해제합니다. 플런저가 최소 300마이크로리터 표시로 후퇴하면 플런저를 1밀리리터 위치로 천천히 후퇴시키기 전에 5초 동안 기다리십시오. 칩 프라이밍 스테이션을 열어 9마이크로리터의 겔-염료 혼합물을 제거하고 겔을 고감도 DNA 칩 'G' 웰의 바닥으로 옮깁니다.
DNA 마커를 로드하려면 5마이크로리터의 DNA 마커를 사다리 웰과 11개의 샘플 웰에 분배합니다. 사다리와 샘플을 로드하려면 DNA 사다리 1마이크로리터를 DNA 사다리 웰에 추가하고, 1마이크로리터의 샘플을 사용된 샘플 웰에, 1마이크로리터의 마커를 사용하지 않은 샘플 웰에
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