0 조회수 • 5:06 분 • July 8th, 2025
중간엽 줄기 세포 또는 MSC는 세포사멸을 유도하는 종양 세포의 특정 수용체에 결합하는 종양 괴사 인자 관련 세포사멸 유도 리간드 또는 TRAIL을 발현하도록 유전자 조작될 수 있습니다.
이러한 MSC를 종양 보유 마우스 모델에 전달하려면 먼저 TRAIL 발현 MSC 시드 바이오폴리머 스캐폴드를 준비합니다. 다음으로, 형광 표지 뇌종양을 가진 마취된 마우스를 정위 프레임에 고정합니다. 마우스에는 뇌에 접근하기 위해 미리 설정된 두개골 창이 있습니다.
가열 패드로 마우스의 체온을 유지합니다. 수술 부위를 살균하고 두피에 정중선 절개를 합니다. 피하 지방을 제거하여 두개골 창을 드러냅니다. 창에서 경막을 떼어내어 밑에 있는 실질 조직과 종양을 노출시킵니다.
이제 형광 입체 현미경으로 형광 종양을 시각화합니다. 뇌에서 형광 종양 조직을 흡인합니다. 생리적 pH를 회복하기 위해 식염수로 세척하십시오. MSC 시드 스캐폴드를 절제 공동에 이식합니다. 적절한 지혈제를 도포하여 비계를 제자리에 고정합니다. 절개 부위를 닫고 마우스가 회복될 때까지 기다립니다.
이식 후, 잔여 종양 병소 내의 종양 세포는 수용성 인자를 분비하여 중간엽 줄기세포가 스캐폴드에서 종양 세포로 이동하는 것을 촉진합니다. 중간엽 줄기세포에 의해 분비되는 TRAIL 단백질은 종양 세포의 특정 수용체에 결합하여 세포사멸을 유도합니다.
형광 해부 입체 현미경의 스테이지에 정위 프레임을 배치하는 것부터 시작합니다. 그런 다음 이소플루란 노즈콘 어댑터를 통해 지속적인 흡입 마취 공급으로 마취된 마우스를 정위 고정 프레임에 고정합니다. 온열 패드로 체온을 유지하십시오. 각막의 건조를 방지하기 위해 눈에 안용 연고를 바르십시오. 그런 다음 알코올 3개와 베타딘 물티슈 3개로 두피 절개 부위를 소독합니다.
각 팔다리에 발가락 꼬집기 반사 테스트를 수행하고 음성 반응을 확인하여 적절한 마취를 보장합니다. 집게를 사용하여 두피를 꼬집고 부드럽게 들어 올립니다. 수술용 가위로 정중선 선형 주둥이-꼬리 절개를 한 후 절개 부위를 PBS로 세척하고 면봉 어플리케이터로 피하 지방을 원형 칫솔질 동작으로 제거합니다.
이전에 설정된 두개골 창이 완전히 보이도록 피부를 배열합니다. 18게이지 바늘을 사용하여 두개골 창의 경계 안쪽에 있는 경막을 부드럽게 뚫습니다. 절개 부위가 창 내부를 완전히 추적할 때까지 반복합니다. 미세한 겸자를 사용하여 경막을 벗겨 제거하면 밑에 있는 실질과 종양이 드러납니다.
그런 다음 실내 조명을 어둡게 하고 실체 현미경 형광 모드를 켭니다. U87 mCherry 및 반딧불이 루시페라제 발현 종양을 찾습니다. 200마이크로리터 피펫 팁을 진공 펌프의 튜브 끝에 넣습니다. 그런 다음 진공 펌프를 켭니다. 신호가 남지 않을 때까지 형광 조직을 부드럽게 흡인하여 종양을 절제합니다. 출혈을 조절하려면 차가운 PBS로 세척하고 면봉 어플리케이터로 일정한 압력을 가하십시오.
스캐폴드를 이식하기 전에 식염수, 면봉 어플리케이터로 일정한 압력 및/또는 SURGICEL과 같은 지혈제를 조합하여 출혈을 멈춥니다. 적절하게 조절하지 않으면 잠재적으로 위험한 혈종이 형성될 수 있습니다. 절제 후 진공 펌프를 끄고 피펫 팁을 폐기하십시오. 형광을 끄면 방의 조명이 다시 켜집니다. 이식 직전에 MSC 시드 PLA 스캐폴드를 PBS에 천천히 담가 원치 않는 배지 및 관련 구성 요소를 제거합니다. 스캐폴드를 절제 공동에 이식합니다.
필요한 경우 피브리노겐 1마이크로리터를 추가한 다음 트롬빈 1마이크로리터를 추가하여 스캐폴드를 제자리에 고정합니다. 경막을 제거하고 두개창의 뼈 피판을 이미 폐기한 상태에서 피부를 닫고 수술용 접착제를 도포하여 상처를 밀봉합니다. 흡입된 마취제에서 동물을 제거하고 가열된 표면에서 회복되도록 합니다.