신경교종 세포의 형광 라벨링: 심부 조직 이미징을 위해 형광 단백질을 발현하는 신경교종 세포를 얻기 위한 렌티바이러스 벡터 기반 형질주입 방법

0 조회수3:39 • July 8th, 2025

생체 내 뇌암 영상은 종양 발달을 관찰하기 위해 형광 표지된 암세포를 마우스 뇌에 주입하는 것을 포함합니다. 형광 표지를 위해 신경아교종 세포를 렌티바이러스 입자와 함께 배양합니다. 렌티바이러스 벡터는 적외선 형광 단백질인 iRFP에 대한 유전자를 운반합니다.

바이러스는 신경아교종 세포 표면에 결합하여 RNA를 세포로 방출합니다. 세포 효소는 바이러스 RNA를 이중 가닥 DNA로 전환하여 세포 게놈에 통합하고 iRFP 발현을 가능하게 합니다. iRFP의 여기 및 방출 최대값은 조직의 흡광도와 산란이 최소화되는 근적외선 영역 내에 있습니다. 이를 통해 정확한 심부 조직 이미징이 가능합니다.

그런 다음 사용한 배지를 제거하고 트립신을 첨가합니다. 프로테아제 효소인 트립신은 접착 단백질을 소화하여 플라스크 표면에서 세포를 분리합니다. 개별 세포를 분리하기 위해 반복적으로 피펫팅합니다. 세포 현탁액을 튜브에 모아 원심분리합니다. 이제 적절한 완충액을 추가하여 펠릿을 재현탁합니다.

세포 현탁액을 유세포 분석 튜브에 분배하고 형광 염료인 DAPI로 세포를 염색합니다. DAPI는 죽은 세포의 핵을 밝은 파란색으로 염색하여 살아있는 세포와 구별합니다. 형광 활성화 세포 분류기 또는 FACS를 사용하여 형광을 기반으로 다른 세포 집단에서 살아있는 iRFP 양성 세포를 분류합니다. 분리된 세포는 종양 이미징을 위해 마우스에 주사하는 데 사용될 수 있습니다.

세포

배양 인큐베이터에서 24시간 배양하기 위해 5밀리리터의 배지에 10-6번째 교모세포종 세포를 10cm 접시에 1회 파종하는 것으로 시작합니다. 다음날 아침, 감염 다중도 5에서 관심 있는 적절한 형광 단백질을 발현하는 렌티바이러스로 세포를 형질도입하고 세포를 인큐베이터로 되돌립니다.

24시간 후, 상청액을 5밀리리터의 신선한 배지로 교체하고 배양액을 48시간 더 배양합니다. 배양이 끝나면 배지를 섭씨 37도에서 10-15분 동안 3-5밀리리터의 트립신으로 교체한 후 분리된 세포를 완전히 해리시키기 위해 조심스럽게 피펫팅합니다.

원심분리로 세포를 수집하고 펠릿을 500마이크로리터의 분류 용액에 재현탁합니다. 세포를 적절한 수의 FACS 튜브로 분할하고 죽은 세포 배제를 위해 DAPI로 세포를 코스테인합니다. 그런 다음 튜브를 유세포 분석기에 로드하고 형광 구조 발현에 따라 살아있는 세포를 신선한 분류 용액이 들어 있는 15밀리리터 원뿔형 튜브에 분류합니다.

원심분리 후, 구조물 양성/DAPI 음성 세포를 5밀리리터의 배양 배지에 재현탁하고 섭씨 37도에서 48-72시간 동안 배양하기 위해 새로운 10센티미터 접시에 파종합니다. 배양이 끝나면 후속 생체 내 실험을 위해 파종할 세포를 여러 접시로 분할합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026