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암 연구
0 조회수 • 4:32 분 • July 8th, 2025
뇌종양 내 세포의 하위 집합인 뇌종양 줄기 세포(BTSC)는 자가 재생 능력을 가지고 있으며 종양 진행 및 치료 저항성에 기여합니다. 시험관 내에서 BTSC 침범에 대한 약물의 효과를 결정하려면 배양 플라스크의 적절한 배지에서 BTSC 현탁액으로 시작합니다. 현탁액 중 하나를 관심 약물로 치료하십시오.
플라스크를 배양합니다. 배지 성분은 세포 증식을 촉진합니다. 세포는 현탁 상태로 남아 신경구라고 하는 구형 클러스터를 형성합니다. 원하는 크기에 도달하면 신경구를 수집합니다. 중력에 의해 침전되고 매체를 제거하도록 하십시오. 그런 다음 처리되지 않은 신경구와 약물 처리된 신경구를 적절한 세포외 기질 단백질과 약물을 포함하는 냉각된 배지에 재현탁합니다.
냉각된 멀티웰 플레이트에 현탁액을 플레이트합니다. 더 나은 이미징을 위해 신경구가 우물 바닥으로 침전되도록 하십시오. 다음으로, 매트릭스 단백질 중합을 위해 배양하여 내부에 신경구를 내장합니다. 살아있는 세포 현미경을 사용하여 장기간 신경구를 이미지화합니다. 배양에서 포매된 BTSC는 단백질 분해 효소를 분비하여 매트릭스 단백질을 분해하여 세포 이동을 가능하게 합니다.
시간이 지남에 따라 증가된 매트릭스 분해는 신경구에서 주변 매트릭스로의 BTSC 침범에 적합한 미세 환경을 생성합니다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 다양한 시점에서 신경구의 총 표면적을 측정합니다. 처리되지 않은 BTSC는 표면적이 증가하여 약물 처리된 BTSC보다 침범률이 증가했음을 나타냅니다.
BTSC 신경구 침범을 평가하기 위해 먼저 신경구 침범 도금 전에 미리 결정된 시간 경과 동안 원하는 농도로 관심 화합물을 플라스크에 첨가합니다. 평균 신경구 크기가 약 150-200마이크로미터에 도달하면 플라스크를 피펫과 부드럽게 혼합하고 얼음 위의 실험 조건당 재현탁된 BTSC 신경구 500마이크로리터를 1.5밀리리터 튜브 1개로 옮깁니다.
신경구 펠릿을 잃지 않고 각 1.5밀리리터 튜브의 바닥에서 가능한 한 많은 배지를 흡인하고 밀리리터당 새로 준비된 0.4밀리그램의 500마이크로리터에 신경구를 부드럽게 재현탁시킵니다. 100마이크로리터의 콜라겐 부유 신경구를 조건당 3개의 웰에 얼음 위의 새로운 96웰 플레이트로 옮기고 신경구가 5분 동안 가라앉도록 합니다.
신경구가 얼음 위에 5분 동안 가라앉도록 하는 것이 중요합니다. 그렇지 않으면 구가 이미징을 위해 동일한 초점면에 있지 않습니다. 세포 배양 인
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