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암 연구
0 조회수 • 4:13 분 • July 8th, 2025
교모세포종은 수초가 있는 뉴런의 축소관을 따라 이동하여 뇌의 먼 위치를 침범하는 줄기 유사 세포를 가지고 있습니다. 시험관 내에서 뉴런에서 교모세포종 또는 GBM 세포의 이동을 요약하려면 유리 커버슬립을 가져가는 것으로 시작합니다.
산소 플라즈마 처리로 커버슬립을 활성화하고 기능제로 프라이밍합니다. 이 처리는 후속 단계에서 화학 물질에 쉽게 접근할 수 있도록 지원합니다. PEG화된 용액을 커버슬립에 첨가하고 배양합니다. 이 용액은 커버슬립을 코팅하여 임의의 위치에서 뉴런 부착을 방지합니다.
광개시제 폴리머를 커버슬립에 분배하고 이미징 챔버에 장착합니다. 챔버를 형광 현미경의 스테이지에 놓습니다. 일단 내부로 들어가면 UV 조명은 구상된 마이크로 패턴에 해당하는 지정된 영역에서 광개시제 분자를 국부적으로 활성화합니다.
활성화된 광개시제 분자는 기본 PEG 층을 절단하여 원하는 패턴을 생성합니다. 이제 라미닌 용액을 넣고 배양합니다. 당단백질인 라미닌은 PEG 층이 제거된 특정 위치에 침착됩니다. 쥐 해마 뉴런을 포함하는 배지를 커버슬립에 시드합니다.
뉴런이 라미닌 코팅 어레이에 부착되어 뉴런 마이크로패턴 커버슬립을 얻을 수 있도록 배양합니다. 미세 패턴 뉴런 위에 형광 표지된 GBM 세포의 현탁액을 증착합니다. 뉴런에서 이동하는 형광 GBM 세포를 볼 수 있는 이미지입니다.
마이크로패터닝을 위한 기판을 만들려면 18mm 원형 유리 커버슬립을 공기 또는 플라즈마 활성화로 5분 동안 처리한 후 커버슬립을 100마이크로리터의 3-아미노프로필 트리에톡시실란이 있는 데시케이터에 1시간 동안 넣습니다. 그런 다음 겔 증착을 위해 밀리리터당 100mg의 Peg-SVA 용액을 1시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 3마이크로리터의 PLPP와 50마이크로리터의 무수 에탄올을 슬라이드 중앙에 넣고 완전히 마를 때까지 기다립니다.
유리 슬라이드 마이크로 패턴화의 경우 커버슬립을 Ludin 챔버에 장착하고 챔버를 자동 초점 시스템이 장착된 현미경의 스테이지에 배치합니다. 이미징 후 마이크로패턴 이미지를 소프트웨어에 로드합니다. 자동 UV 조명 시퀀싱 후 피펫을 사용하여 커버슬립에서 PLPP를 PBS로 광범위하게 세척합니다. 그런 다음 커버슬립을 라미닌 밀리리터당 50마이크로그램과 함께 30분 동안 배양한 다음 시연된 대로 PBS로 다시 세척합니다.
미세 패턴이 있는 커버슬립에 배아 쥐 해마 뉴런 배양을 설정하려면 마지막 세척 후 유리 슬라이드를 신경 세포 배양 배지로 재수화합니다. 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 24시간 배양하기 위해 제곱센티미터당 3% 말 혈청이 풍부한 신경기저 배지에 현탁된 네 번째 쥐 해마 뉴런에 5회 10번 시드합니다. 해리된 교모세포종 세포를 1,000rpm에서 5분 동안 원심분리하고 펠릿을 교모세포종 세포 배양 배지에 재현탁합니다. 그런 다음 미세 패턴 뉴런 위에 세 번째 GBM 세포에 10배 10을 증착합니다.