쥐 신경주위 침입 모델: 마우스 좌골 신경에서 신경주위 침입을 시뮬레이션하기 위한 생체 내 모델 생성

신경주위 침범은 암세포가 기원 부위에서 전이되어 신경 내의 신경주위 공간을 침범하는 드문 전이 현상입니다. 신경 미세 환경은 암의 성장과 증식에 적합한 환경을 제공합니다.

생체 내에서 신경주위 침범을 시뮬레이션하려면 마취된 마우스를 엎드린 자세로 준비합니다. 허벅지 뼈 - 대퇴골 아래에 작고 평행한 절개를 합니다. 허벅지 근육을 분리하여 신체에서 가장 크고 가장 쉽게 접근할 수 있는 신경인 밑에 있는 좌골 신경을 드러냅니다.

좌골 신경은 척추 아래쪽에서 시작되어 골반 근육을 통해 각 다리까지 이어집니다. 하지의 조정된 움직임을 위한 신호를 전달합니다. 다음으로, 신경에서 주변 근육을 제거하고 주사 지지를 위해 멸균된 주걱을 사용하여 바깥쪽으로 당깁니다.

이제 암세포 현탁액을 채운 주사기를 가져다가 신경에 병렬로 주입합니다. 신경의 눈에 띄는 돌출은 성공적인 주사를 확인하는 반면, 주사 부위 주변의 누출은 시도 실패를 나타냅니다. 간단히 말해서, 세포가 신경 내에서 안정화되도록 하십시오.

그런 다음 바늘을 부드럽게 집어넣고 근육의 위치를 바꿉니다. 그런 다음 절개 부위를 봉합합니다. 마우스가 복구되도록 합니다. 결국 암세포는 주사 부위에서 척수로 이동하기 시작하여 신경주위 침범을 확인합니다.

수술 전날 8주 된 수컷 또는 암컷 C57BL/6J 마우스의 등쪽 대퇴골 길이를 따라 수술용 이발기 또는 화학적 제모제를 사용하여 털을 제거합니다. 수술 당일에는 스테이지를 소독하고 유도실에서 2% 이소플루란을 사용하여 마우스를 마취한 후 눈에 수의사 연고를 발라 마취 하에서 건조함을 방지합니다.

체중에 맞는 양의 진통제를 피하 주입하고 마우스를 수술 부위의 코뿔로 옮깁니다. 수술 과정 전반에 걸쳐 열 지원이 제공됩니다. 마취된 마우스를 복부에 놓고 저자극성 테이프로 각 팔다리를 부드럽게 고정하여 주사할 팔다리에 가벼운 긴장을 줍니다.

베타딘 면봉으로 주사 부위를 닦은 다음 다시 70% 알코올로 청소합니다. 이 과정을 두 번 더 반복하고 수술 부위에 느슨한 머리카락이 남아 있지 않은지 확인하십시오. 마지막 단계로 베타딘 용액을 수술 부위에 바릅니다. 멸균 장갑을 착용하고 멸균 드레이프를 놓은 후 드레이프 아래에 절개를 하기 전에 전용 멸균 도구를 사용하여 발가락을 꼬집습니다.

그런 다음 멸균 작은 가위를 사용하여 대퇴골과 평행하게 약 1mm 아래에 2cm 절개를 합니다. 집게로 피부를 옆으로 집어넣어 아래 근육을 노출시킵니다. 근막면을 따라 대둔근과 대퇴이두근을 분리하고 그 아래에 좌골 신경을 노출시킵니다. 둔기 해부를 사용하여 주변 근육에서 신경을 풀어줍니다.

펠릿에서 3마이크로리터의 암세포를 멸균 10마이크로리터 주사기로 끌어냅니다. 지지를 위해 주사 지점의 신경 아래에 작은 금속 주걱을 놓습니다. 해부 현미경으로 시각화하면서 바늘을 신경과 평행하게 유지하고 신경에 삽입합니다. 신경 뒤쪽에 구멍이 나지 않도록 주의하십시오.

5초에 걸쳐 세포를 천천히 신경에 주입합니다. 주입 영역에 전구가 형성되면 주입이 양호함을 나타냅니다. 바늘을 부드럽게 제거하기 전에 역류를 최소화하기 위해 바늘을 3초 동안 제자리에 두십시오. 좌골 신경에 암세포를 적절하게 주입하는 것이 중요합니다. 세포가 신경 외부에 주입되면 침범의 일관성이 저하됩니다. 그러나 연습과 경험을 통해 이것은 매우 드뭅니다.

주사 후 신경을 원래 위치로 되돌리고 위에 있는 근육으로 신경을 덮습니다. 적절한 진통제로 마우스를 치료한 다음 5-0 나일론 봉합사로 피부를 봉합합니다. 관찰을 위해 마우스를 깨끗한 케이지에 혼자 넣고 흉골 누운 자세를 유지할 수 있는 충분한 의식을 회복할 때까지 회복 중에 열 지원을 제공합니다.