종양 세포를 제브라피시 배아로 장기 정소성 이식: 종양 세포 거동의 장기 분석을 위해 종양 세포를 제브라피시 배아의 제4심실로 전달하는 효율적인 방법

동소 이식 중에 종양 보유 기증자의 종양 세포 또는 조직이 동일한 종의 수혜자의 해당 조직에 이식됩니다. 먼저, 종양이 있는 제브라피쉬로부터 수확한 형광 표지 뇌종양 세포의 균일한 현탁액을 적절한 완충액에 준비합니다. 미세한 젤 로딩 팁을 사용하여 이 세포 현탁액을 미세 주입 바늘에 로드합니다.

그런 다음 로드된 바늘을 마이크로 매니퓰레이터의 홀더에 고정합니다. 그 후, 마취된 제브라피쉬 배아를 조립식 주입 플레이트로 옮깁니다. 미세 주사 중에 쉽게 접근할 수 있도록 배아를 측면으로 배치하여 뇌 내에서 뇌척수액으로 채워진 공동의 네트워크인 뇌실을 시각화합니다.

바늘 끝을 조정하여 종양 세포 현탁액을 배아 후뇌의 다이아몬드 모양 공동인 제4뇌실에 주입합니다. 종양 세포는 심실 내의 빈 공간을 차지합니다. 바늘을 집어넣습니다. 배아를 식염수가 들어 있는 배양 접시에 옮깁니다. 형광 입체현미경으로 배아를 관찰하여 심실 공간 내에 종양 세포가 있는지 확인합니다.

배아를 부화시킵니다. 주사 후 몇 시간 이내에 종양 세포는 이동하여 주변 뇌 조직을 침범한 다음 증식하여 새로운 종양을 생성합니다. 시간이 지남에 따라 종양 세포는 증식하고 더 침범하여 뇌 전체로 퍼집니다.

이송 피펫을 사용하여 10-20개의 마취된 배아를 주입 플레이트의 주변으로 옮깁니다. 배아는 심실이 명확하게 보이고 접근할 수 있는 상태에서 측면으로 떨어져야 합니다. 각진 프로브를 사용하여 필요에 따라 배아를 조정하고 주입 플레이트의 바깥쪽 가장자리에서 멀리 떨어진 곳에 배치합니다.

그런 다음 젤 로딩 팁을 사용하여 1-2마이크로리터의 종양 세포 현탁액을 주사 바늘에 넣고 바늘을 매니퓰레이터에 삽입합니다. 그런 다음 바늘을 45도 각도로 잡고 조작기를 수동으로 내립니다. 바늘이 배아 머리 바로 위와 오른쪽으로 약 5mm 정도 될 때까지 마이크로 매니퓰레이터의 손잡이를 x, y 및 z 방향으로 조정합니다.

실체 현미경을 사용하여 바늘이 배아의 네 번째 뇌실을 관통할 때까지 마이크로 매니퓰레이터를 x 방향으로 천천히 조정합니다. 바늘이 심장이나 노른자를 뚫지 않도록 하십시오. 일관된 주사를 위해서는 배아를 마취해야 합니다. 종양은 세포 현탁액으로 적절하게 해리되어야 하며 바늘은 제4뇌실을 관통해야 하지만 심장 너머로 확장되어서는 안 됩니다.

마이크로인젝터 풋 페달을 밟아 종양 세포 현탁액을 주입합니다. 주사가 끝나면 신선한 계란물을 사용하여 주입된 배아를 주