쥐 모델에서 치료용 신경 줄기세포(NSC)의 비강 내 전달: 종양 용해성 바이러스가 로드된 NSC를 뇌종양 베어링 마우스 모델에 종양 표적 전달하기 위한 절차

시작하려면 신경 줄기 세포 또는 NSC 배양을 저산소 조건에 노출시킵니다. 이러한 전처리는 향상된 NSC 증식 및 종양 표적 능력을 촉진합니다. 다음으로, NSC를 수확하고 원하는 농도의 조건부 복제 종양 용해성 바이러스로 처리합니다. 바이러스를 세포에 로드하기 위해 배양합니다.

이제 배양액을 원심분리하여 결합되지 않은 바이러스를 제거합니다. 바이러스가 탑재된 NSC를 적절한 완충액에 재현탁합니다. 한편, 콧구멍에 더 쉽게 접근할 수 있도록 마취된 뇌종양 보유 마우스를 누운 자세로 배치합니다. 바이러스가 탑재된 NSC를 마우스의 각 콧구멍에 조심스럽게 투여하고 짧은 시간 간격으로 반복합니다.

마우스가 복구되도록 합니다. 비강에서 비강 내 투여된 NSC는 혈액-뇌 장벽을 우회하여 뇌로 들어갑니다. 뇌 내부에서 바이러스는 이러한 사전 조정된 세포 내에서 복제되어 종양 부위로 이동하여 면역 체계로부터 자신을 보호합니다. 시간이 지남에 따라 NSC에서 방출된 바이러스 입자는 종양 세포에서 과발현된 특정 세포 표면 수용체와 상호 작용하고 결합합니다.

바이러스 내재화 후, 이러한 조건부 복제 바이러스는 종양 세포에서 우선적으로 복제되어 세포 용해를 일으킵니다. 용해된 종양 세포는 바이러스 입자를 방출하여 주변 종양 세포를 감염시켜 일련의 감염 및 종양 세포 용해를 초래합니다. 세포 용해는 종양 항원을 노출시켜 종양 세포에 대한 면역 반응을 활성화합니다.

인간 신경 줄기 세포에 종양 용해성 바이러스를 로드하려면 표준 아데노바이러스 형질감염 프로토콜에 따라 주기적으로 태핑하면서 실온에서 2시간 동안 세포당 아데노바이러스 바이러스 입자의 조건부 복제 50개로 줄기 세포를 감염시킵니다. 그런 다음 세포를 신선한 배지로 세 번 세척하여 결합되지 않은 바이러스 입자를 제거하고 비강 내 전달을 위해 세포를 멸균 식염수에 현탁시킵니다.

세포가 실험적으로 적절하게 변형되면 마취된 종양 보유 동물을 열 패드 위의 깨끗한 드레이프 위에 누운 자세로 놓고 머리 아래에 패딩 베개를 놓아 콧구멍을 직립 각도로 유지합니다. 베개 재질은 잡종동물 오염을 방지하기 위해 알코올로 닦을 수 있는 플라스틱 또는 일회용 말아올린 종이 타월이어야 합니다.

마우스가 제자리에 있으면 마이크로피펫을 사용하여 관심 있는 실험적 인간 신경 줄기 세포 집단 2마이크로리터를 첫 번째 마우스의 각 콧구멍에 분배하고 다음 부피의 세포를 적용하기 전에 물방울의 흡인을 육안으로