미세종양의 생성: 약물 치료에 대한 반응을 분석하기 위해 3D 미세종양을 배양하는 체외 배양 기술

미세종양(3차원 시험관 내 종양 세포 응집체)은 생체 내 종양 미세 환경을 밀접하게 모방하며 약물 효능을 평가하기 위한 유망한 플랫폼 역할을 합니다. 미세종양을 생성하려면 환자 유래 종양 세포를 균일하게 현탁하는 것으로 시작하십시오.

다음으로, 세포 현탁액을 냉각된 인간 유래 세포외 기질 또는 ECM의 원하는 부피로 희석합니다. 소량의 이 세포-매트릭스 혼합물을 소량의 피펫을 소수성 코팅이 된 핀이 포함된 맞춤형 금속판에 피펫팅합니다. 핀의 소수성 코팅을 통해 물방울이 구형 모양을 유지할 수 있습니다.

ECM의 겔화를 촉진하고 내부에 세포를 내장하기 위해 배양합니다. 이제 세포 포매 겔 비드를 적절한 배지가 들어 있는 대용량 배양 플레이트로 옮깁니다. 원하는 기간 동안 배양합니다. 배양에서 캡슐화된 세포는 자극되지 않은 세포 성장을 위한 환경을 제공하는 ECM 매트릭스 내에서 응집되기 시작합니다.

또한 배지 성분은 매트릭스를 통해 확산되고 세포 증식을 촉진하여 비드 내에서 3차원 미세 종양을 형성하는 것을 촉진합니다. 그 후, 미세종양 함유 비드를 배지가 들어 있는 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 관심 있는 약물로 미세 종양 한 세트를 치료하고 배양합니다.

격주로 배지와 약물 용액으로 미세 종양을 보충하십시오. 살아있는 세포 이미징을 통해 미세 종양의 세포 형태를 결정합니다. 치료되지 않은 미세종양은 지속적인 성장을 보이는 반면, 약물에 민감한 미세종양은 억제된 성장을 보입니다.

미세 종양을 생성하려면 해리된 환자 유래 교모세포종 이종 세포를 회전시키고 FBS 2마이크로리터당 50,000개 세포에서 펠릿을 재현탁합니다. 다음으로, 얼음처럼 차가운 고밀도 인간 바이오겔에서 세포를 1 대 4 세포 대 바이오겔 비율로 희석합니다. 그런 다음 전자 다중 채널 피펫을 사용하여 소수성 코팅이 된 96핀 강판에 핀당 10마이크로리터의 세포 혼합물을 분배합니다.

세포, 배지 및 바이오겔을 혼합할 때 기포를 방지하는 동시에 인간 바이오겔이 핀에서 응고되기 시작하기 전에 미세 종양을 생성하기 위해 빠르고 효율적으로 작동하는 것이 중요합니다.

모든 종양이 도금되면 3D 종양을 조직 배양 인큐베이터에 20분 동안 옮겨 종양 비드를 겔화합니다. 배양이 끝나면 미세종양을 완전한 신경기저 배지가 들어 있는 10cm 배양 접시로 옮기고 종양을 인큐베이터로 되돌립니다.

1-2일 후, 넓은 입 디스펜싱 피펫을 사용하여 미세 종양을 웰당 50마이크