심폐 복합체 탈세포화: 쥐 모델에서 심장 및 폐를 탈세포화하는 기술

탈세포화는 ECM 구조를 그대로 유지하면서 세포 구성 요소의 기관을 제거합니다. 이는 장기의 3D 구조를 보존하는 데 도움이 됩니다. 탈세포화 절차를 위해 안락사된 마우스를 바로 누운 자세로 눕힙니다. 마우스를 해부하고 심폐 복합체를 노출시킵니다.

대동맥과 폐 순환의 주요 혈관을 제외하고 심장에서 시작되는 모든 주요 혈관을 결찰합니다. 이 단계는 후속 관류 절차 중 체액 누출을 방지합니다. 기관에 구멍을 만들고 이 구멍을 통해 카테터를 삽입합니다. 카테터가 대동맥궁에 도달할 때까지 바닥에서 하행 대동맥을 카테터로 삽입합니다.

카테터를 봉합하여 위치를 고정하고 관류 펌프에 연결합니다. 탈이온수로 관류를 시작합니다. 대동맥을 통한 관류는 전체 심장 맥관 구조에서 혈액을 효율적으로 제거할 수 있습니다. 결국 물은 폐로 이어지는 폐동맥으로 들어갑니다.

폐 맥관 구조에서 혈액을 완전히 제거한 후 물 관류를 중단하고 순한 것부터 강한 것까지 다양한 세제 용액으로 교체하십시오. 이 절차는 세포를 용해하여 세포내 성분을 방출하여 심장과 폐를 반투명하게 보이게 합니다.

탈이온수로 다시 관류하여 남아 있는 세제 분자를 제거합니다. 탈세포화된 심폐 복합체를 항생제 함유 용액에 보관하면 긴 유통기한을 보장합니다.

발기로 안락사된 쥐의 흉부, 복부, 등을 면도하는 것부터 시작하십시오. 70% 에탄올로 해당 부위를 소독하십시오. 그런 다음 마우스를 폴리스티렌 트레이에 고정하여 앞다리와 뒷다리, 머리와 꼬리를 확장합니다. 미세수술 현미경 아래에 놓습니다.

Mayo 직선 패턴 가위를 사용하여 턱밑 부위에서 하복부까지 피부 절개를 하고 피하 해부하여 흉벽과 복막을 노출시킵니다. 그런 다음 미세수술 가위를 사용하여 흉벽 양쪽의 여섯 번째 늑간 공간을 따라 대흉근과 소흉근을 자릅니다.

직선 패턴 가위로 이전 절개 부위를 따라 흉골을 자릅니다. 그런 다음 장축을 따라 흉골을 절단하여 흉골 절개술을 완료합니다. 흉벽의 양쪽을 들어 올리고 고정하여 심폐 복합체를 노출시킵니다. 끝이 둥근 마이크로 겸자를 사용하여 흉선과 주변 지방 조직을 부착물에서 섬세하게 잡아당겨 절제하고 마이크로 가위로 식도를 자릅니다.

카로운 마이크로 겸자로 상완두정맥과 상완두동맥을 분리합니다. 그런 다음 결찰 및 소작을 용이하게 하기 위해 왼쪽 총경동맥과 왼쪽 쇄골하 동맥을 밑에 있는 조직에서 분리합니다. 마이크로 바늘 홀더와 날카로운 마이크로 겸자 및 9-0 봉합사를 사용하여 상완두부 좌총경동맥 및 좌측 쇄골하 동맥의 출현 위에 봉합을 배치합니다. 상완두정맥을 소작합니다.

마이크로 가위를 사용하여 인대를 절단하여 입구를 엽니다. 기관지에 27게이지 카테터를 삽입하고 기관지가 방해받지 않도록 주의하면서 기관지가 기관지로 분기될 때까지 섬세하게 밀어냅니다. 6-0 봉합사를 사용하여 기관 주위에 세 바늘을 꿰매어 카테터를 고정합니다.

12번째 흉추 높이에서 마우스를 절편합니다. 하행 대동맥은 척추 앞쪽으로 이어지며 척추와 함께 여기에서 절단되어야 합니다. 대동맥을 역행적으로 카테터를 삽입하고 대동맥궁에 도달할 때까지 카테터를 밉니다. 봉합사를 사용하여 카테터 끝 아래 5mm부터 시작하여 대동맥 주위에 4개의 바늘을 꿰매십시오.

실리콘 튜브와 하단 커넥터를 사용하여 마우스를 펌프 시스템에 연결합니다. 분당 200마이크로리터의 탈이온수로 15분 동안 관류합니다. 그런 다음 관류제를 탈이온수에 희석한 0.5% DOC로 바꾸고 밤새 관류합니다. 다음날 관류제를 탈이온수에 희석한 0.1% SDS로 바꾸고 8시간 동안 관류합니다. 그런 다음 탈이온수로 24시간 동안 관류하여 SDS와 DOC를 씻어냅니다.

탈세포화된 심장과 폐를 흉부에 부착물을 절개하여 절제합니다. 조직을 섭씨 4도에서 1% 페니실린-스트렙토마이신 및 0.3마이크로몰 아지드화나트륨이 포함된 탈이온수에 멸균 냉동관에 보관합니다.