고립된 쥐 배아에 microbubbles의 주입: 살아있는 쥐 배아의 혈관 구조로 microbubble 조영제를 전달하는 기술

마이크로버블 전달의 경우, 튜브에 연결된 주사기에 기체 코어를 포함하는 내피 세포 표적 지질 껍질 미세 기포의 균일한 현탁액으로 시작합니다.

이 어셈블리를 주사기 펌프에 넣고 유리 바늘을 튜브에 부착합니다. 이제 특정 내피 세포 수용체를 발현하는 냉각된 마우스 배아를 입체경 스테이지에 놓인 접시로 옮깁니다.

난황낭과 양막에서 배아를 부드럽게 외부로 제거합니다. 주머니와 태반 가장자리를 고정합니다. 혈류를 회복하기 위해 따뜻한 완충액으로 배아를 헹굽니다. 최적의 초음파 투과를 위해 미리 예열된 초음파 젤로 배아를 덮습니다. 생리적 상태를 유지하기 위해 완충액을 보충하십시오.

주사기 펌프를 사용하여 태반 디스크의 태아막 표면에 있는 적절한 정맥에 원하는 유속으로 미세 기포 현탁액을 조심스럽게 주입합니다. 주입된 미세 기포는 순환계를 통해 이동하여 혈관을 감싸고 있는 내피 세포의 특정 수용체에 결합합니다.

초음파 변환기를 사용하여 고주파 초음파를 배아에 전달합니다. 마이크로버블의 압축성이 높은 가스 코어는 미세버블을 비선형적으로 진동시켜 입사파와 다른 주파수의 초음파를 산란시킵니다. 이러한 신호와 조직의 선형 신호는 변환기로 돌아갑니다.

변환기는 이를 미세 기포 산란 신호와 조직 신호를 구별하는 이미징 시스템으로 전달하여 배아 혈관의 조영 증강 초음파 이미지를 생성합니다.

필요한 양의 미세 기포 원액을 피펫팅하고 식염수 분취량에 첨가하십시오. 피펫 끝으로 부드럽게 저어주어 섞습니다. 그런 다음 21게이지 바늘을 사용하여 희석된 미세 기포 용액을 깨끗한 주사기에 끌어당깁니다. 바늘을 제거한 후 주사기에서 기포를 제거하고 루어와 튜브를 부착합니다. 기포가 발생하지 않도록 용액을 튜브 끝까지 천천히 밀어 넣습니다.

마지막으로 총 20마이크로리터의 부피에 대해 분당 20마이크로리터의 속도로 미세 기포를 분배하도록 설정된 주사기 주입 펌프에 주사기를 삽입합니다. 당긴 유리 바늘을 튜브 끝에 부착합니다. 펌프를 주입 단계 가까이로 이동합니다.tage. 천공된 숟가락을 사용하여 냉장 배지 접시에서 하나의 배아를 무작위로 선택하고 제거합니다. 입체경 아래 초음파 스테이지에 위치한 해부 접시에 배아를 넣습니다.

다음으로, 혈관이 가장 적게 형성된 것으로 보이는 배아의 쪽을 찾습니다. 여기에 일반적으로 머리 부위에 인접한 낮은 혈관 형성 영역이 있습니다. 그런 다음 미세한 집게를 사용하여 난황낭과 양막을 내부에서 배아를 제거할 수 있