운동 열사병 마우스 모델: 운동 열사병의 기전을 연구하기 위한 프로토콜

운동성 열사병(EHS)은 덥고 습한 환경에서 신체적 과로로 인한 체온의 급격한 상승으로 인해 신경 기능 장애와 다기관 손상을 초래하여 발생합니다.

EHS에 대한 전임상 모델을 확립하려면 심부 체온을 지속적으로 모니터링할 수 있는 무선 원격 측정 장치가 이식된 마우스를 사용합니다. 강제 주행 휠과 온도 모니터링 장치가 장착된 인공 기후 챔버에 마우스를 놓습니다.

마우스를 챔버에 적응시키기 위해 온도를 주변 수준으로 설정합니다. 마우스가 안정되면 체중을 기록합니다. 다음으로, 챔버의 온도와 습도를 목표 수준으로 설정합니다. 동시에 빛 방해를 줄이기 위해 암막 커튼으로 챔버를 둘러쌉니다.

챔버가 목표 조건에 도달하면 챔버 도어를 빠르게 열고 강제 주행 휠에 마우스를 놓습니다. 휠을 움직이기 시작하고 점차적으로 속도를 높입니다. 마우스의 체온은 운동의 결과로 상승합니다. 마우스가 최대 심부 온도에 도달한 후 휠 속도를 일정하게 유지하십시오.

휠을 멈추기 위해 마우스에 피로의 징후가 있는지 관찰하십시오. 그런 다음 인공 기후 챔버에서 마우스를 꺼내 무게를 측정합니다. 마우스를 홈 케이지로 옮기고 동물이 주변 온도에서 회복할 수 있도록 합니다.

운동성 열사병 프로토콜 전날 밤, 마우스를 실온의 환경 챔버에 넣어 챔버에 적응시킵니다. 데이터 수집 시스템을 사용하여 밤새 30초 간격으로 평균화된 연속 심부 체온 또는 Tc를 수집합니다. 운동성 열사병 프로토콜 당일 아침, 마우스가 이 기간 동안 열이 나거나 과도한 스트레스를 경험하지 않았는지 확인하기 위해 챔버 온도를 높이기 전에 마우스가 섭씨 36도에서 37.5도의 정상 주간 온도 범위 이하인지 확인하십시오.

쥐가 안정되고 정상적인 휴식 심부 체온 범위 내에 있으면 음식과 물을 제거하고 동물의 무게를 잰다. 챔버 도어를 닫고 챔버 온도를 섭씨 37.5도 및 상대 습도 40%에서 50% 또는 원하는 환경 온도 및 습도의 목표로 높입니다. 보정된 온도 및 습도 모니터로 챔버 온도와 습도를 확인합니다.

프로토콜 중에 빛과 방해를 최소화하기 위해 암막 커튼으로 챔버를 둘러쌉니다. 원격 IR 조명 카메라를 통해 프로토콜 중에 마우스를 지속적으로 모니터링합니다. 두 번째 카메라를 주행 휠 가까이에 배치된 온도 및 습도 모니터에 초점을 맞춥니다. 동물 근처의 정확한 온도 판독값을 보장하기 위해 환경 챔버 설정점에 대한 컨트롤러를 조정하십시오.

챔버가 온도 모니터의 두 번째 카메라로 측정한 목표 온도에 도달하면 챔버 도어를 빠르게 열고 마우스를 강제 주행 휠에 놓습니다. 분당 2.5미터의 속도로 강제 러닝 휠 프로토콜을 시작하고 마우스가 심부 온도가 섭씨 41도에 도달할 때까지 10분마다 분당 0.3미터씩 속도를 높입니다

심부 체온에 도달하면 명백한 의식 상실, 뒤로 넘어지거나 실신, 계속 달리거나 바퀴를 잡을 수 없는 증상 제한이 발생할 때까지 속도를 일정하게 유지하십시오. 마우스가 물리적 반응의 징후 없이 휠에서 세 번 뒤로 회전하는 시점을 확인합니다. 또는 로컬 IACUC 규칙에 따라 인도적인 엔드포인트를 식별하여 프로토콜을 중지할 시기를 결정합니다. 이 종점은 본질적으로 모든 마우스에서 증상 제한보다 약간 높습니다.

급속 냉각 프로토콜을 수행하려면 마우스가 증상 제한에 도달하면 휠을 멈추고 강제 실행 휠에서 마우스를 즉시 제거합니다. 마우스의 무게를 측정하고 실온에서 회복하기 위해 홈 케이지에 다시 넣습니다. 이 시간 동안 챔버 도어를 열어 두고 인큐베이터 설정점을 실온으로 되돌려 챔버가 빠르게 냉각되도록 하여 99% 이상의 장기 생존을 가져옵니다.