신생아 마우스 난소 격리: 신생아 마우스 모델에서 한 쌍의 난소를 수확하는 수술 절차

신생아 마우스 난소를 분리하려면 안락사된 신생아 마우스 새끼를 수술 플랫폼에서 바로 누운 자세로 시작합니다. 피부와 체벽을 긴 수술 절개하여 복강을 노출시킵니다. 다음으로, 장을 부드럽게 옮겨 밑에 있는 자궁 뿔을 드러냅니다.

자궁 뿔은 자궁경부에서 수렴하고 방광에서 신장을 향해 확장되는 두 개의 긴 관형 구조입니다. 난관을 통해 연결된 자궁 뿔 끝의 신장 바로 아래에 위치한 작은 타원형 땀샘인 난소를 식별합니다.

이제 각 자궁 뿔에서 난소의 부착 부위를 잘라 난소를 풀어줍니다. 절제된 난소를 조직 내 난모세포의 생존력을 유지하기 위해 적절한 예열 배지가 들어 있는 멸균 배양 접시로 즉시 옮깁니다. 배양 접시를 해부 현미경의 가열된 단계에 놓습니다.

바늘을 사용하여 난소 활액낭, 난소를 둘러싼 결합 조직 주머니 및 난관의 잔해를 조심스럽게 제거합니다. 마지막으로, 난소를 배지가 들어 있는 멀티웰 플레이트로 옮깁니다. 분리된 난소는 다운스트림 처리에 사용할 수 있습니다.

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밀리리터의 해부 배지를 각 멸균 유리 배아 접시에 옮기는 것으로 시작합니다. 생후 0-5일의 새끼를 도태한 후 미세한 집게로 복벽을 덮고 있는 피부를 잡고 피부와 체벽을 절개합니다. 이 큰 절개 부위를 당겨 복부를 노출시킵니다. 방광은 일반적으로 이 단계에서 충혈되며 해부를 더 쉽게 하기 위해 구멍을 뚫을 수 있습니다.

시계 제작자 집게를 사용하여 내장을 옆으로 옮깁니다. 그런 다음 양쪽에서 방광에서 신장까지 자궁 뿔을 따라갑니다. 난소는 자궁 상단의 신장 바로 아래에 위치한 구름 모양의 구조입니다. 난소를 부드럽게 잡고 가위를 사용하여 자궁에서 잘라냅니다. 양쪽 난소를 해부한 후 따뜻한 해부 배지로 채워진 접시에 옮깁니다.

섭씨 37도에서 가열된 스테이지가 있는 해부 현미경을 사용하여 난소를 해부합니다. 인슐린 바늘을 사용하여 난소만 남을 때까지 활액낭과 나팔관을 포함한 여분의 물질을 잘라냅니다. 그런 다음 곡선 피펫을 사용하여 각 난소를 준비된 플레이트의 웰로 옮깁니다.