담즙계 수지 주조: 방사선 불투과성 수지 주입을 이용하여 쥐 모델에서 담즙계의 3D 구조를 분석하는 기법

담도계는 간, 담낭 및 담즙을 장으로 운반하는 총담관 또는 CBD를 형성하기 위해 결합되는 덕트 네트워크로 구성됩니다.

담도계 레진 캐스팅의 경우, 간과 담낭에서 혈액을 제거하기 위해 관류된 마우스를 가져 가십시오.

마우스를 바로 누운 자세로 놓습니다.

해부 현미경으로 복강을 시각화하여 간의 내장 표면을 찾아 오디 괄약근(CBD가 장에 들어가기 전에 CBD의 말단에 존재하는 근육층)을 식별합니다.

Oddi 괄약근 옆 CBD에 비스듬한 절개를 합니다.

CBD에 튜브를 삽입합니다. 튜브의 다른 쪽 끝을 유색 및 방사선 불투과성 수지 현탁액이 들어 있는 주사기에 연결합니다.

수지 현탁액을 덕트에 주입합니다.

레진은 CBD에서 더 작은 담관 네트워크로 이동하여 결국 간과 담낭 내부로 퍼집니다. 확산은 작은 덕트의 단자를 통한 유색 수지의 움직임을 시각화하여 추적할 수 있습니다.

튜브를 제거하고 수지가 중합되도록 합니다.

덕트의 마이크로 CT 이미지를 얻습니다. 방사선 불투과성인 레진은 X선이 통과하는 것을 허용하지 않아 담도계와 대비를 제공하고 3D 구조를 분석하는 데 도움이 됩니다.

마우스의 담도계에 레진을 주입하기 전에 PBS에 적신 면봉을 사용하여 장과 췌장을 마우스의 왼쪽으로 움직여 총담관과 문맥을 노출시킵니다. 그런 다음 하대정맥에 작은 횡방향 절개를 합니다. 간의 복부를 심장 쪽으로 돌려 내장 표면과 폐문 부위를 노출시키고 폐문 부위에서 췌장을 가로질러 오디 괄약근에서 장으로 이어지는 총담관을 찾습니다. 직선 겸자를 사용하여 총담관에서 약 5mm의 주변 조직 영역을 제거합니다.

그런 다음 총담관 아래에 실크 봉합사를 놓고 총담관 주위에 느슨한 오버핸드 매듭을 묶습니다. 스프링 가위를 총담관에 평평하게 대고 총담관이 췌장과 장으로 들어가는 지점, 오디 괄약근 옆에서 총담관을 비스듬히 절개합니다. 다음으로, 노란색 수지 1밀리리터와 MV 경화제 50마이크로리터를 혼합하고 루어 주사기 1밀리리터에 수지 경화제 혼합물을 채웁니다.

채워진 주사기를 튜브 세트 #1에 연결하고 플런저를 눌러 수지 경화제 혼합물이 튜브 끝에서 떨어질 때까지 튜브를 채웁니다. 집게를 사용하여 총담관 절개 부위를 곧게 펴고 튜브를 총담관의 개구부에 삽입하고 경사진 끝의 가장 긴 가장자리가 담관의 등쪽을 향해 아래쪽으로 향하도록 합니다. 그런 다음 실크 실 매듭을 조여 총담관 내부에 튜브를 고정합니다.

총담관에 레진을 주입한 후 담낭과 개별 간엽을 관찰합니다. PBS에 적신 면봉으로 간을 마사지하여 레진을 균등하게 펴 바르는 데 도움을 줍니다. 레진으로 채워진 담관의 말단 가지는 간 표면에서 희미하게 보입니다. 간 표면에 레진 점이 나타나거나 저항이 발생하면 레진 주입을 중지하십시오. 그런 다음 총담관에서 튜브를 빼내고 집게를 사용하여 실크 매듭을 빠르게 조여 수지가 새는 것을 방지합니다.