대사 질환의 타겟 검증에서 종단적 영상 촬영이 중요한 이유는 무엇입니까?

종단적 이미징은 동일한 동물에서 시간 경과에 따른 세포 역학의 반복적인 관찰을 가능하게 하여, 연구자가 베타 세포 기능 및 섬 구조에 미치는 표적 매개 효과의 지속성과 일관성을 평가할 수 있게 하며, 이는 표적 검증 프로그램에서 더 확신 있는 go/no-go 결정을 내릴 수 있도록 지원합니다.

장 운동으로부터 췌도(pancreatic islets)를 분리하는 것이 어떻게 데이터 품질을 향상시키나요?

금속 판으로 지지되는 이미징 창은 췌장과 장을 공간적으로 분리하여 연동 운동으로 인한 움직임 아티팩트를 줄여주며, 세포 구조의 안정적인 고해상도 이미징을 가능하게 하여 어세이 개발에서 신뢰할 수 있는 정량적 측정에 필수적인 역할을 합니다.

이 모델에서 베타 세포 기능을 평가할 수 있게 하는 정량적 측정 항목은 무엇입니까?

이 방법은 타임랩스 및 z-스택 이미징을 통해 베타 세포 이동, 세포 내 칼슘 플럭스, 섬 크기 및 혈관 관류를 측정할 수 있게 하며, 이를 통해 질병 관련 시스템 내에서 유전적 또는 약리학적 중재와 표현형 결과 사이의 연관성을 보여주는 기능적 리드아웃을 제공합니다.

이미징 기반 분석에서 교차 기능 협업을 위해 반복 실험 요건이 중요한 이유는 무엇인가요?

재현성은 동물, 실험자 및 실험 회차 간에 이미징 결과가 일관되게 나타남을 보장하며, 이는 분석 결과에 대한 신뢰도를 높이고 탐색, 중개 및 전임상 팀 간에 화합물 효과를 안정적으로 비교하는 데 매우 중요합니다.

발견 파이프라인에 생체 내 이미징(intravital imaging)을 구현하기 전에 어떤 통계 분석 역량이 필요한가요?

실행을 위해서는 형광 강도 추적, 객체 분할 및 시계열 통계를 포함한 정량적 이미지 분석 능력이 필요하며, 이를 통해 조건들을 비교하고 세포 역학 또는 구조에서 관찰된 변화의 유의성을 평가해야 합니다.

Intravital Imaging: 안정화된 이미징 창을 통해 마우스 췌장의 세포 수준을 관찰하는 방법

JoVE Encyclopedia of Experiments

생물학

0 조회수 • 3:40 분 • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

생체 내 이미징에는 동물에 이식된 이미징 창을 통해 살아있는 동물의 세포를 시각화하는 작업이 포함됩니다. 이를 통해 세포 역학의 기능을 손상시키지 않고 장기간 관찰할 수 있습니다.

시작하려면 금속판에 지지된 췌장 이미징 창으로 이전에 이식된 마취된 형질전환 마우스를 가져 가십시오. 베이스 플레이트는 췌장을 장에서 공간적으로 분리하여 연동 운동과 같은 생리적 움직임으로 인한 운동 인공물을 줄입니다.

형질전환 마우스는 췌장 섬의 베타 세포에서 발현되는 인슐린 유전자 프로모터 하에서 녹색 형광 단백질 또는 GFP를 발현합니다.

그런 다음 마우스 꼬리를 단단히 잡고 소독제를 뿌려 표면 오염 물질을 제거합니다. 측면 꼬리 정맥에 카테터를 삽입합니다. 적색 형광 프로브로 태그가 지정된 항체가 포함된 용액을 꼬리 정맥에 주입합니다. 이 항체는 혈관을 감싸고 있는 세포에 결합하여 세포를 붉게 염색합니다.

이제 마우스를 생체 내 현미경 설정으로 전환합니다. 췌장 이미징 창을 창 홀더에 삽입합니다. 적색 형광 혈관으로 둘러싸인 녹색 형광 섬 클러스터를 찾기 위해 저배율로 이미징을 시작합니다. 배율을 높여 개별 베타 세포의 고품질 세포 수준 이미징을 얻습니다.

레이저 출력을 포함하여 생체 내 현미경을 켜는 것부터 시작하십시오. 혈관 카테터를 삽입하려면 검지와 세 번째 손가락으로 꼬리의 근위부에 압력을 가합니다. 필요한 경우 램프로 꼬리를 가열하십시오. 70% 에탄올 스프레이로 꼬리 정맥을 소독한 다음 측면 꼬리 정맥에 30게이지 카테터를 삽입하고 PE-10 튜브에서 혈액의 역류를 시각화합니다. 카테터를 안정시키기 위해 실크 테이프를 붙입니다

형광 프로브의 조합에 따라 FITC 덱스트란 및 TMR 덱스트란 또는 기타 형광 프로브를 적절하게 주입합니다. 직장 프로브를 삽입하여 홈열 가열 패드 시스템으로 체온을 자동으로 제어합니다. 그런 다음 생체 현미경 설정 중에 준비된 췌장 이미징 창을 창 홀더에 삽입합니다. 마우스를 수술 플랫폼에서 이미징 단계로 옮깁니다.

생체 내 이미징을 수행하려면 4배와 같은 낮은 배율로 췌장을 이미징하여 판장 이미징 창에서 췌장의 전체 보기를 스캔하는 것으로 시작합니다. 관심 영역이 결정되면 20배 또는 40배와 같은 더 높은 배율의 대물 렌즈로 전환하여 각각 약 0.5마이크로미터 및 3마이크로미터의 측면 및 축 해상도로 세포 수준 이미징을 수행합니다.

z-스택 또는 타임랩스 이미징을 수행하여 세포 이동과 같은 3D 구조 또는 세포 수준 역학을 관찰합니다.